蛋白純化通用問(wèn)題(一)
更新時(shí)間:2022-08-11 點(diǎn)擊次數:1279
那么下面上海金鵬分析儀器有限公司為大家簡(jiǎn)單介紹一下蛋白純化通用問(wèn)題(一)。
1、層析柱的壽命多久,可以用多長(cháng)時(shí)間?
答:填料的使用次數依據不同的目的和條件而有差異。在使用過(guò)程中注意操作規范,定期清潔維護,可以使柱子保持*佳狀態(tài)。
2、柱子堵了,超壓如何處理?
答:可能原因 :緩沖液或樣品未進(jìn)行過(guò)濾、蛋白沉淀或雜質(zhì)殘留、清洗不及時(shí)等引起層析柱濾膜堵塞 ;流速過(guò)快、流動(dòng)相粘度 ( 如乙醇等 ) 過(guò)高、溫度過(guò)低。
建議處理方法 :首先將柱子卸下來(lái),確定是系統還是柱子堵了。如果是柱子堵了 :參考說(shuō)明書(shū) CIP 操作進(jìn)行清潔 ;更換層析柱頂端濾膜或超聲清洗 。測定柱效或重復之前做過(guò)的樣品。后續,注意樣品前處理 ( 如核酸的去除、樣品緩沖液條件 ) 以及層析柱的日常維護。
3、如何去除樣品中的 DNA/RNA 等核酸雜質(zhì)污染?
答:延長(cháng)超聲時(shí)間以降低粘度。也可以使用核酸酶如 Benzonase 同時(shí)消化 DNA 和 RNA。如果來(lái)源是大腸桿菌裂解液,含有大量的DNA,可以用鏈霉素沉淀等方法,預先去除大量的 DNA。
通過(guò)層析方法去除 :由于核酸帶負電,在陰離子柱上會(huì )結合或陽(yáng)離子柱上流穿,也可以有效去除核酸。
去除填料上結合的核酸 : 一般采用 1M NaOH + 1M NaCl 對核酸的去除效果較好(需要確認填料是否可耐受NaOH)。如果核酸的吸附過(guò)強,會(huì )采用強烈的方法,3M 氯化鈉去除靠靜電吸附的核酸,然后用 1M 的氫氧化鈉分解核酸,之后再用 3M NaCl 清洗。
可用Heparin預裝柱或者填料:如果樣品是核酸結合蛋白,Heparin可結合核酸結合蛋白,從而使核酸流穿。 貨號:17040601,17099801
4、柱子進(jìn)氣泡或跑干了,怎么辦?
答:可能的原因 :環(huán)境溫度變化 ;緩沖液未經(jīng)過(guò)脫氣 ;層析柱連接系統或操作不當。
建議處理方法 :用大量脫氣去離子水或 20% 乙醇反向高速沖洗層析柱,直到小氣泡被帶出 ( 沖洗過(guò)程建議在系統連接反壓閥之后進(jìn)行) 。如果大量進(jìn)氣,建議重新裝柱。
5、不同樣品檢測的吸光度值?
答:蛋白樣品*大吸收值一般在 280 nm,核酸或病毒在 254 nm或 260 nm ;多肽 215 nm ;多糖 206 nm。
6、柱子有色素如何去除?
答:色素性質(zhì)很復雜,可以根據填料的耐受情況,優(yōu)先嘗試NaOH 清洗,另外,也可以使用有機溶劑(如 30% 異丙醇或乙醇),*后再?lài)L試酸,如 0.01 M HCl(需要確認填料耐受性)。 如果去除不掉,可以定期把色素污染部分的填料去除。
以上就是上海金鵬分析儀器有限公司為大家整理總結關(guān)于蛋白純化通用問(wèn)題(一)。
我們上海金鵬分析儀器有限公司是專(zhuān)業(yè)生產(chǎn)超蛋白純化系統、超微量核酸蛋白測定儀、化學(xué)發(fā)光成像系統、凝膠成像分析系統、紫外分析儀、核酸蛋白檢測儀、紫外檢測儀、光化學(xué)反應儀、旋渦混合器、恒流泵、自動(dòng)部分收集器等為核心的十幾個(gè)產(chǎn)品系列的廠(chǎng)家,歡迎大家前來(lái)訂購