蛋白純化通用問(wèn)題(二)
更新時(shí)間:2022-08-23 點(diǎn)擊次數:1012
那么下面上海金鵬分析儀器有限公司為大家簡(jiǎn)單介紹一下蛋白純化通用問(wèn)題(二)。
7、填料如何儲存?
答:請參考說(shuō)明書(shū)。大部分填料可以在 4-40℃ 儲存,不可以冷凍,注意北方的冬天有時(shí)候室溫低于零度,運輸和儲存應避免凍住。儲存過(guò)程中,注意避免填料干掉,或低溫產(chǎn)生氣泡。
儲存液 :對于耐堿的層析介質(zhì),可以使用 0.01M NaOH 作為儲存液 ;對于不耐堿比如親和介質(zhì),一般是用 20% 的乙醇或 2% 苯甲醇作為儲存試劑。
8、樣品與緩沖液怎么脫氣和過(guò)濾?
答:溶液和樣品必須過(guò)濾(0.2um或者0.45um的濾膜過(guò)濾)和脫氣,可以使用負壓抽濾瓶過(guò)濾,并且在負壓條件下保持10min脫氣。脫氣的方法還包括:超聲15min以上或者使用注射用水配制緩沖液。對于小體積樣品的過(guò)濾,可以使用高速離心的方式,吸取上清。
9、AKTA系統的清洗和保存?
答:按時(shí)清洗系統或遇到問(wèn)題時(shí)清洗系統。用1M NaOH ,小流速清洗系統30min,之后立即用0.5M NaCl和去離子水將NaOH沖洗干凈并且系統pH保持在中性。系統長(cháng)時(shí)間不使用,需保存在20%乙醇中。
10、如何進(jìn)行柱前壓校準?
答:取決于柱位閥,斷開(kāi)所有流路,在system control-system-calibration-歸零。
11、AKTA pure與prime plus的*大耐受壓力?
答:pure 25是20Mpa,pure 150是5Mpa;prime plus 是1Mpa;紫外電導2MPa,PH電極耐壓0.5MPa。
12、如何設置報警壓力?
答:
系統配有多柱位閥:
可以檢測柱子的柱前Pre C壓力,柱后Post C壓力,并且計算出Delta C壓力。
分別設置Pre Column Pressure和Delta Column Pressure的壓力報警保護柱子。
系統無(wú)多柱位閥:
先用管道代替柱子連接設備,在工作流速下測定系統本身的壓力,此為空載壓力。
Pre Column Pressure為Max Pre-Column Pressure和Max Delta Column Pressure+空載壓力中較低值。
13、在正確設置了報警壓后,層析柱接入AKTA,總是超壓報警?
答:首先判斷AKTA系統是否本身壓力過(guò)高,在線(xiàn)濾膜或者反壓閥堵塞,正常情況下反壓閥空跑系統壓力為0.2左右。如果系統沒(méi)有問(wèn)題,接入柱子出現超壓,可能是柱子堵塞或者連接柱子的管線(xiàn)折彎造成超壓,調整連接管線(xiàn)或者按說(shuō)明書(shū)方式清洗層析柱。
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