Western blot成像方法取決于二抗的標記物，常用的方法有基于酶促反應的化學(xué)發(fā)光法，基于熒光染料的可見(jiàn)熒光方法和紅外熒光方法，那么我們應該如何選擇呢？
*合適的Western blot實(shí)驗方法取決于您期望獲得哪些信息，也就是取決于您的實(shí)驗目的，小編比較了現有方法的優(yōu)缺點(diǎn)，并分享了自己的心得，希望能夠幫助您選擇到*佳的實(shí)驗方法。

化學(xué)發(fā)光方法
化學(xué)發(fā)光western blot是相對容易且靈敏度*的檢測方法，靈敏度可以達到fg級。
適用于研究：通過(guò)電泳可輕松分離的分子量差異顯著(zhù)的蛋白。

> 檢測單一蛋白
> 確定蛋白有無(wú)
> 檢測抗體反應
> 蛋白純度分析
> 檢測低豐度蛋白
 

 
熒光檢測方法
熒光染料分為可見(jiàn)熒光染料和紅外熒光染料，從而將熒光western blot檢測分為可見(jiàn)熒光檢測和紅外熒光檢測。目前可見(jiàn)熒光檢測*多三個(gè)通道，可以同時(shí)檢測三種不同的蛋白，近紅外檢測*多為兩個(gè)通道，一定選擇激光光源激發(fā)的哦，更接近近紅外染料的*大發(fā)射波長(cháng)680nm和800nm，增強二抗信號，提高檢測的靈敏度。
熒光Western blot使用熒光染料標記的二抗進(jìn)行檢測，膜上的靶標蛋白濃度與可見(jiàn)熒光信號強度呈線(xiàn)性關(guān)系，實(shí)現真實(shí)可靠的定量分析。熒光染料發(fā)射光譜不同，因此在一張印跡膜上可實(shí)現多重檢測。在無(wú)需剝離和重孵育條件下，進(jìn)行上樣量質(zhì)控，可以分析翻譯后修飾蛋白。
因此當您進(jìn)行如下實(shí)驗室，選擇熒光檢測方法，妥妥的：

> 同時(shí)檢測多種蛋白
> 研究翻譯后修飾蛋白
> 同一印跡膜的上樣質(zhì)控
> **定量western blot實(shí)驗
 

 
期刊雜志要求：
例如nature中“Image Integrity and Standards”中鼓勵在一張印跡膜上進(jìn)行內參和目的蛋白的的檢測，同時(shí)使用合理的標準化方法：例如：全蛋白歸一化。


 
化學(xué)發(fā)光屬于酶促反應，動(dòng)態(tài)范圍窄，只能實(shí)現定性分析，一次只能檢測一個(gè)信號，如要檢測多個(gè)信號，需要剝離和重孵育，如使用膠片成像，還需要反復摸索曝光時(shí)間，顯影定影設備和設備的維護，熒光檢測可同時(shí)滿(mǎn)足期刊雜志發(fā)表要求、一次可進(jìn)行多個(gè)信號檢測，反應條件一致，jingzhun定量，特別近紅外熒光檢測方法，具有低背景，高信噪比，是現在western blot熒光定量的金標準。