再論生物化學(xué)發(fā)光測量?jì)x原理，作用和特點(diǎn)

生物化學(xué)發(fā)光測量?jì)x的化學(xué)發(fā)光作為一種分析工具的吸引之處就在于檢測的簡(jiǎn)單性?；瘜W(xué)發(fā)光的實(shí)質(zhì)是自身發(fā)光，這意味著(zhù)化學(xué)發(fā)光的分析測試儀器只需要提供一種可以檢測光信號和紀錄結果的方法就可以了。自發(fā)光檢測儀需要一個(gè)閉光的樣品室和光檢測器。*簡(jiǎn)單的便是相片紙或X 光片，甚至視覺(jué)檢測器都可以。

化學(xué)發(fā)光檢測方法的簡(jiǎn)單性使得它的應用很簡(jiǎn)單并且*可以自動(dòng)化。但是它的靈敏度又是怎么樣的呢？化學(xué)發(fā)光有如下兩個(gè)內在的優(yōu)勢：

1.絕大多數的樣品沒(méi)有“背景”信號，如它們自身不發(fā)光。

2.化學(xué)發(fā)光的檢測不是一個(gè)比例測試，這是與熒光和吸收或比色測試不同的。在熒光測試中，具有小的Stokes Shift的熒光基團非常難檢測。熒光很難從激發(fā)波長(cháng)中分辨出來(lái)。 另外一個(gè)問(wèn)題是，特別在樣品是渾濁的情況下有一部分雜光會(huì )進(jìn)入到檢測器。

在吸收光測試上，其靈敏度受到限制的根本因素是需要在兩個(gè)相對較強的信號之間去區分一個(gè)較小的差別。

需要注意的是檢測器對光譜的敏感性近可能接近化學(xué)發(fā)光的光譜，以得到*大化的靈敏度。一般在自發(fā)光儀中的光電倍增管對藍光有*佳的反應，對紅光的末端光譜不太敏感。固態(tài)檢測器對紅光有較好的反應。

X 光片廣泛用于記錄在尼龍膜、纖維素膜或PVDF 膜上的化學(xué)發(fā)光印跡分析。但是我們需要牢記在心的是X 光片僅能夠用于檢測紫外到藍光光譜范圍內的光信號，雖然有一些特殊的光片對增強的綠光有敏感性。

生物化學(xué)發(fā)光測量?jì)x液體樣品的檢測

有一些特定的詞來(lái)描繪化學(xué)發(fā)光檢測：靈敏度、線(xiàn)性和動(dòng)態(tài)范圍。每一個(gè)詞的意義如下：

1.靈敏度指的是某種東西可靠檢測的*低水平。“某種東西”是指在一個(gè)分析測試中的測試物。測試物是被標記了一種可檢測的東西，如化學(xué)發(fā)光化合物或的一種酶。分析物也可以是一種通過(guò)與具有標記的親合物有特異性結合反應而檢測的物質(zhì)。所謂的可靠檢測指的是針對一個(gè)空白測試樣品，檢測器能夠重復感應到*低水平的信號，而這種信號是由所檢測物本身產(chǎn)生的。

2.線(xiàn)性描述的是信號與分析檢測物濃度范圍之間的關(guān)系。理想的比例因子是常數；信號點(diǎn)與分析檢測物是一條直線(xiàn)關(guān)系。標準曲線(xiàn)可以不是直線(xiàn)，如s 形，仍是有用的。

3.動(dòng)態(tài)范圍指的是被檢測物濃度與信號單一模式的變換范圍。它定義的是分析的工作范圍。

通過(guò)生物化學(xué)發(fā)光測量?jì)x的化學(xué)發(fā)光得到什么水平的靈敏度呢？答案不一定會(huì )滿(mǎn)足你的要求，“它是有條件的”。在很少情況下，檢測器的靈敏度或化學(xué)發(fā)光方**是檢測的局限因素?，F在的檢測器可以達到很高的靈敏度。大多數情況下，而是其它的一些因素顯示了分析檢測的靈敏度。*通常的是生物成分（抗體、酶等）的非特異性結合到反應容器和支持物的表面。例如，mianyi分析，印跡實(shí)驗，核酸雜交和其它的酶聯(lián)結合實(shí)驗都是受制于此因素。