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大鼠Wnt-2b蛋白(WNT2b)酶聯(lián)mianyi檢測試劑盒使用說(shuō)明書(shū)
更新時(shí)間:2019-06-21 點(diǎn)擊次數:900

使用前仔細閱讀本說(shuō)明書(shū)。本酶聯(lián)mianyi試劑盒是基于雙抗體夾心技術(shù)原理,來(lái)檢測大鼠Wnt2B,只能用于研究用途,不得用于醫學(xué)診斷。
用    途用于大鼠血清、血漿及相關(guān)液體樣本中Wnt2B測定。
工作原理
   本試劑盒采用的是生物素雙抗體夾心酶聯(lián)mianyi吸附法(ELISA)測定樣品中大鼠Wnt2B水平。向預先包被了大鼠Wnt2B單克隆抗體的酶標孔中加入大鼠Wnt2B,溫育;溫育后,加入生物素標記的抗Wnt2B抗體。再與鏈霉親和素-HRP結合,形成mianyi復合物,再經(jīng)過(guò)溫育和洗滌,去除未結合的酶,然后加入底物A、B,產(chǎn)生藍色,并在酸的作用下轉化成*終的黃色。顏色的深淺與樣品中大鼠Wnt2B的濃度呈正相關(guān)。
試劑盒組成

試劑盒組成48孔配置96孔配置保存
說(shuō)明書(shū)1份1份 
封板膜2片(48)2片(96) 
密封袋1個(gè)1個(gè) 
酶標包被板1×481×962-8℃保存
標準品160ng/L0.5ml×1瓶0.5ml×1瓶2-8℃保存
標準品稀釋液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存
鏈霉親和素-HRP3 ml×1瓶6 ml×1瓶2-8℃保存
生物素標記的抗WNT2B抗體0.5ml×1瓶1 ml×1瓶2-8℃保存
顯色劑A液3 ml×1瓶6 ml×1瓶2-8℃保存
顯色劑B液3 ml×1瓶6 ml×1瓶2-8℃保存
終止液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存
濃縮洗滌液(20ml×20倍)×1瓶(20ml×30倍)×1瓶2-8℃保存

 
需要而未提供的試劑和器材

  1. 37℃恒溫箱。
  2. 標準規格酶標儀。
  3. 精密移液器及一次性吸頭
  4. 蒸餾水,
  5. 一次性試管
  6. 吸水紙

 
注意事項

  1. 從2-8℃取出的試劑盒,在開(kāi)啟試劑盒之前要室溫平衡至少30分鐘。酶標包被板開(kāi)封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存。
  2. 各步加樣均應使用加樣器,并經(jīng)常校對其準確性,以避免試驗誤差
  3. 嚴格按照說(shuō)明書(shū)的操作進(jìn)行,試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.
  4. 為避免交叉污染,要避免重復使用手中的吸頭和封板膜。
  5. 不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。
  6. 底物B對光敏感,避免長(cháng)時(shí)間暴露于光下。

 
洗板方法
手工洗板方法:甩掉酶標板內的液體;在實(shí)驗臺上鋪墊幾層吸水紙,酶標板朝下用力拍幾次;將稀釋后的洗滌液至少0.35ml注入孔內,浸泡1-2分鐘。根據需要,重復此過(guò)程數次。
 
自動(dòng)洗板:如果有自動(dòng)洗板機,應在熟練使用后再用到正式實(shí)驗過(guò)程中
標本要求
1.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過(guò)氧化物酶的(HRP)活性。
2.標本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻進(jìn)行,提取后應盡快進(jìn)行實(shí)驗。若不能馬上進(jìn)行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融。
操作程序

  1. 標準品的稀釋?zhuān)?本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶(hù)可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。)
80ng/L5號標準品120μl的原倍標準品加入120μl標準品稀釋液
40ng/L4號標準品120μl的5號標準品加入120μl標準品稀釋液
20 ng/L3號標準品120μl的4號標準品加入120μl標準品稀釋液
10ng/L2號標準品120μl的3號標準品加入120μl標準品稀釋液
5 ng/L1號標準品120μl的2號標準品加入120μl標準品稀釋液

 
  2.根據代測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數。每個(gè)標準品和空白孔建議做復孔。每個(gè)樣品根據自己的數量來(lái)定,能使用復孔的盡量做復孔。
  3.加樣:1)空白孔,空白對照孔不加樣品,生物素標記的抗WNT2B抗體,鏈霉親和素-HRP,只加顯色劑A&B和終止液,其余各步操作相同;2)標準品孔:加入標準品50ul,鏈霉親和素-HRP50ul(標準品中已事先整合好生物素抗體,故不加);3)代測樣品孔:加入樣本40ul,然后各加入抗WNT2B抗體10ul、鏈霉親和素-HRP50ul,蓋上封板膜,輕輕震蕩混勻,37℃溫育60分鐘。
  4.配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用。
  5.洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿(mǎn)洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。
 6.顯色:每孔先加入顯色劑A50ul,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.
 7.終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時(shí)藍色立轉黃色)。
 8.測定:以空白空調零,450nm波長(cháng)依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加終止液后10分鐘以?xún)冗M(jìn)行。
 9.根據標準品的濃度及對應的OD值計算出標準曲線(xiàn)的直線(xiàn)回歸方程,再根據樣品的OD值在回歸方程上計算出對應的樣品濃度。也可以使用各種應用軟件來(lái)計算。 
 
操作程序總結:


試劑盒性能:

1.樣品線(xiàn)性回歸與預期濃度相關(guān)系數R值為0.92以上。
2.批內與批間應分別小于9%和15%
 
檢測范圍:
檢測范圍:2ng/L -90ng/L
 
保存條件及有效期:
 
保存:2-8℃。
有效期:6個(gè)月(2-8℃)。

聯(lián)系方式

郵件:sh-jiapeng@163.com
傳真:021-36162369
郵編:200444
地址:上海市真陳路1398弄15號
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