一、流動(dòng)相的PH應在使用的范圍內
由于流動(dòng)相的PH 控制不當而對色譜柱造成的損害,通常很難使色譜柱恢復,因此必須認真對待,嚴格控制流動(dòng)相的PH值。
二、去除樣品和流動(dòng)相中的固體顆粒
樣品和流動(dòng)相中含有的固體顆粒物質(zhì)會(huì )堵塞色譜柱篩板,篩板被堵住不僅會(huì )引起柱壓的升高,而且也會(huì )引起柱效下降,因為篩板的堵塞會(huì )引起液流不均,導致色譜峰型拖尾、變寬,從而使柱效下降。因此,建議使用超純水和色譜純試劑,在分析樣品前對樣品進(jìn)行針筒過(guò)濾,流動(dòng)相過(guò)0.45μm濾膜。
三、使用保護柱或在線(xiàn)過(guò)濾器
樣品和流動(dòng)相經(jīng)過(guò)濾后并不能*消除固體顆粒物質(zhì),因為泵的磨損、密封圈和管路的老化也會(huì )產(chǎn)生固體顆粒物質(zhì),這些固體顆粒被流動(dòng)相帶入色譜柱,堵塞篩板,導致柱壓升高、柱效下降。保護柱和在線(xiàn)過(guò)濾器上都有篩板,其孔徑與色譜柱孔徑相同,因此可以阻止固體顆粒物質(zhì)到達色譜柱,有效防止色譜柱篩板的堵塞。由于柱壓升高在分析故障中占很大比例,因此,除對樣品和流動(dòng)相進(jìn)行過(guò)濾外,建議您在色譜柱進(jìn)樣端加上保護柱或在線(xiàn)過(guò)濾器。
如果色譜柱柱壓升高是由于進(jìn)樣端篩板被堵引起的,可選擇一下方式進(jìn)行補救:
1、先在色譜柱前加上保護柱或在線(xiàn)過(guò)濾器,然后用甲醇、水=20/80ml/min反向沖色譜柱180min。
2、先在色譜柱進(jìn)樣端加上保護柱或在線(xiàn)過(guò)濾器,然后反向使用。
四、正確使用緩沖鹽
緩沖鹽通常易溶于水,難溶于有機溶劑,因此緩沖鹽使用不當會(huì )使其析出,堵塞填料基質(zhì)上的微孔和顆粒間的空隙,使填料板結,柱壓上升;同時(shí)阻礙了基質(zhì)上鍵合的碳鏈自由舒展,使色譜柱的保留能力下降,柱效降低。緩沖鹽析出后,去除非常困難,因此,正確的使用緩沖鹽對延長(cháng)色譜柱使用壽命非常重要。
五、防止強保留物質(zhì)在色譜柱上存留
強保留物質(zhì)和大分子化合物在色譜柱中累積,對樣品中的化合物產(chǎn)生額外的保留行為,不僅引起峰型變寬、拖尾,使柱效下降,同時(shí)也會(huì )引起保留時(shí)間的變化,累積到一定程度時(shí)還會(huì )導致柱壓升高。由于強保留物質(zhì)和大分子化合物對色譜分離的影響是一個(gè)累積效應,需要一定的時(shí)間才會(huì )體現出來(lái),但對許多藥品特別是復雜樣品而言,很難判斷其是否是含有強保留物質(zhì),因此要防止強保留物質(zhì)的累積,需要在每天的日常維護中用純甲醇或乙氰清洗色譜柱。