<sup id="ukeuu"><noscript id="ukeuu"></noscript></sup>
<sup id="ukeuu"></sup>
<sup id="ukeuu"><wbr id="ukeuu"></wbr></sup>
<sup id="ukeuu"></sup>
<object id="ukeuu"></object><sup id="ukeuu"></sup>
<object id="ukeuu"><wbr id="ukeuu"></wbr></object>
<sup id="ukeuu"><option id="ukeuu"></option></sup>
<object id="ukeuu"><noscript id="ukeuu"></noscript></object>
<sup id="ukeuu"><noscript id="ukeuu"></noscript></sup>
<tt id="ukeuu"></tt>
網(wǎng)站導航

技術(shù)文章

當前位置:主頁(yè) > 技術(shù)文章 > 核酸的電泳與檢測
核酸的電泳與檢測
更新時(shí)間:2015-05-27 點(diǎn)擊次數:1029

實(shí)驗目的】
(1)了解核酸瓊脂糖凝膠電泳的原理,學(xué)會(huì )其具體的操作程序。
(2)對提取的DNA進(jìn)行檢測,掌握紫外電泳圖譜的觀(guān)察分析方法。
【實(shí)驗原理】
瓊脂糖凝膠電泳是一種非常簡(jiǎn)便、快速、zui常用的分離純化和鑒定核酸的方法。帶電荷的物質(zhì)在電場(chǎng)中的定向運動(dòng)稱(chēng)為電泳,核酸分子是兩性解離分子,在pH8.0時(shí),DNA分子帶負電荷在電場(chǎng)中向正極移動(dòng)。采用瓊脂糖凝膠介質(zhì)作為電泳支持物,長(cháng)度不同的DNA分子由于受凝膠阻遏作用大小不一,遷移速度不同,從而達到有效分離DNA的目的。
【儀器、材料、試劑】
(一)儀器
1.電泳裝置:電泳儀、水平電泳槽、梳子、制膠槽
2.紫外觀(guān)察:凝膠成像系統
3.高速離心機
(二)材料
1.瓊脂糖
2.三羥甲基氨基甲烷(Tris)
3.硼酸
4.乙二胺四乙酸(EDTA)
5.溴酚藍
6.蔗糖
7.溴化乙錠(EB)
8.DNA Marker(λDNA)
9.稱(chēng)量紙、容量瓶、瓷盤(pán)、一次性手套、取液器、三角瓶、量筒(100mL)、Tip頭(10uL)、膠帶
(三)試劑配制 
1.5×TBE(pH8.0)(電泳緩沖液) 1000 ml
配制方法:
稱(chēng)取Tris 54g、硼酸 27.5 g,再加入20ml的0.5mol/LEDTA加三蒸水定容至
1000ml搖勻后,轉到準備好的輸液瓶中,貼上標簽,高壓滅菌后,降至室溫,4℃保存備用。
2.凝膠加樣緩沖液(6×)(指示劑) 100 ml
稱(chēng)取溴酚藍0.25 g、蔗糖40 g然后加入三蒸水定容至100ml搖勻后,4℃保存備用。
【實(shí)驗步驟】
(一)、制膠
1.稱(chēng)取0.4g(適量)瓊脂糖置于三角瓶中,加入50ml 0.5×TBE緩沖液。
2.微波爐加熱,煮沸、振搖,反復加熱、振搖2-3次,使瓊脂糖充分融化。
3.膠帶將膠床兩端粘好,底部粘嚴,以防凝膠滲漏,插好梳子。
4.待膠冷卻至60℃左右時(shí),將融化的瓊脂糖小心地倒入膠床中,速度要快,讓 膠自然冷卻至*凝固(約需要20-30分鐘)。
5. 小心向上方拔出梳子,避免前后左右搖晃,以防破壞膠面及加樣孔,去掉制膠槽兩邊的膠帶,小心將膠和膠床放入電泳槽中,樣品孔在陰。
6. 向電泳槽中加入0.5×TBE電泳緩沖液,液面高于膠面約1-2mm。
(二)、上樣電泳
1、取2μl上樣液(溴酚藍指示劑)于Parafilm上,加2μl水與2μl樣品DNA反復吹吸,混勻。
2、Tip頭垂直伸入液面下膠孔中,小心上樣于孔中。
3、接通電源,打開(kāi)高壓開(kāi)關(guān),電泳開(kāi)始以正、負極鉑金絲有氣泡出現為準。
4、根據指示劑遷移的位置,判斷是否中止電泳。切斷電源后,再取出凝膠。
5、凝膠取出后于含EB的溶液中染色20分鐘。
(三)、凝膠紫外觀(guān)察:
染色后的凝膠取出于紫外監測儀或凝膠成像系統中觀(guān)察,照相,保存,記錄結果。
【注意事項】www.bbioo。。com
1. 瓊脂糖融化時(shí),檔位不宜太高。
2. 制膠和加樣過(guò)程中要防治氣泡的產(chǎn)生。
3. EB具有強誘變性,可致癌。必須戴手套操作,嚴格注意防護。
4. 加樣時(shí),Tip頭不宜插入樣品孔太深,也不要穿破膠孔壁,否則樣品滲漏或
DNA帶型不整齊。
5. 電源接通時(shí),應核實(shí)凝膠的方向是否正確。
6. 電泳儀有電壓顯示,并不一定標志電泳槽已接通,應觀(guān)察電極氣泡出現情況。
負極的氣泡比正極多一倍,表示電泳已開(kāi)始。
7. 溴化乙錠可插入到DNA分子的雙鏈中,在紫外光的照射下,插入溴化乙錠的DNA呈橙紅色熒光,所以溴化乙錠可以作為熒光指示劑指示DNA含量和位置。 

聯(lián)系方式

郵件:sh-jiapeng@163.com
傳真:021-36162369
郵編:200444
地址:上海市真陳路1398弄15號
在線(xiàn)客服 聯(lián)系方式 二維碼

服務(wù)熱線(xiàn)

021-66030766

掃一掃,關(guān)注我們

<sup id="ukeuu"><noscript id="ukeuu"></noscript></sup>
<sup id="ukeuu"></sup>
<sup id="ukeuu"><wbr id="ukeuu"></wbr></sup>
<sup id="ukeuu"></sup>
<object id="ukeuu"></object><sup id="ukeuu"></sup>
<object id="ukeuu"><wbr id="ukeuu"></wbr></object>
<sup id="ukeuu"><option id="ukeuu"></option></sup>
<object id="ukeuu"><noscript id="ukeuu"></noscript></object>
<sup id="ukeuu"><noscript id="ukeuu"></noscript></sup>
<tt id="ukeuu"></tt>
诸暨市| 民乐县| 盖州市| 明星| 乌什县| 视频| 中超| 中方县| 余庆县| 汶川县| 神池县| 龙泉市| 枞阳县| 彝良县| 密山市| 城步| 东山县| 盐山县| 江城| 泗阳县| 景东| 泰来县| 合江县| 长治县| 阿拉善左旗| 巩义市| 习水县| 满城县| 安阳县| 邓州市| 岱山县| 平乐县| 荣昌县| 四会市| 仁怀市| 安福县| 兴隆县| 新龙县| 方城县| 拉孜县| 双柏县| http://444 http://444 http://444 http://444 http://444 http://444