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體外重組蛋白表達的蛋白純化標簽如何選擇
更新時(shí)間:2021-08-26 點(diǎn)擊次數:1167

 那么下面上海金鵬分析儀器有限公司為大家簡(jiǎn)單介紹一下關(guān)于體外重組蛋白表達的蛋白純化標簽如何選擇。 

       體外重組蛋白表達技術(shù)已經(jīng)滲透到生物學(xué)的各個(gè)領(lǐng)域。目前,體外重組蛋白表達系統主要有四類(lèi):原核表達系統、哺乳動(dòng)物細胞表達、酵母表達系統及昆蟲(chóng)細胞表達。表達的一般實(shí)驗包括載體構建-表達鑒定-蛋白純化三大步驟。在構建載體階段,除了一些必要的表達元件,還需要考慮的密碼子優(yōu)化和標簽的選擇。選擇合適的標簽不但有利于蛋白的純化,促進(jìn)蛋白的可溶性,同時(shí)也不能影響蛋白的結構功能和下游應用。感謝使用上海金鵬蛋白純化系統Blupadstart進(jìn)行蛋白純化分離實(shí)驗。

本文詳細介紹了幾種蛋白純化標簽,幫助我們更好的設計實(shí)驗。
蛋白純化標簽比較

融合標簽大?。↘D)功能是否切除
HIS0.84有利純化,能純化可溶性/包涵體蛋白標簽小,對蛋白無(wú)影響
GST26增強蛋白可溶性,僅能純化可溶性蛋白,屏蔽毒性蛋白標簽較大,影響較大
MBP44.4增強蛋白可溶性,屏蔽毒性蛋白
NusA55增強蛋白可溶性,屏蔽毒性蛋白
SUMO11.2增強可溶性,屏蔽毒性蛋白

表1:各個(gè)標簽性能對比表


HIS-Tag(組氨酸標簽)

HIS-Tag蛋白純化的標簽
HIS-Tag本身的特性對目的蛋白沒(méi)有影響,不會(huì )形成二聚體;

  1. 分子量較小,只有0.84KD,對蛋白的下游應用不會(huì )產(chǎn)生影響;

  2. 原性低,可將純化的蛋白直接注射動(dòng)物進(jìn)行并制備抗體;

  3. HIS-Tag與的轉錄翻譯機制兼容,有利于蛋白表達;

  4. 可與其他標簽構建雙標簽表達,可用于多種蛋白表達系統,純化條件溫和對蛋白影響較小。

GST-Tag(谷胱甘肽巰基轉移酶標簽)
GST-Tag相對分子質(zhì)量較大,約為26KD,插入在目的蛋白的C末端或N末端,大腸桿菌中常用在N端。GST(谷胱甘肽巰基轉移酶) 蛋白本身是一個(gè)在**過(guò)程中起到重要作用的轉移酶。一般選擇GST標簽的目的有兩個(gè),一是提高蛋白表達的可溶性,二是提高蛋白的表達量。蛋白表達純化結束后需根據不同的蛋白應用而確定是否切除標簽,標簽較大,切除與否需根據下游應用考慮。如果要去除GST融合部分,可用位點(diǎn)特異性蛋白酶切除。檢測方法可用GST抗體或表達的目的蛋白特異性抗體檢測。

HIS-Tag由6-10個(gè)組氨酸殘基組成,分子量不到0.84KD,,通常插入在目的蛋白的C末端或N末端。HIS-Tag是目前原核表達常用的標簽,蛋白純化完之后可以不需切除此標簽,也不會(huì )對蛋白產(chǎn)生功能影響。同時(shí),蛋白純化步驟簡(jiǎn)便,純化條件溫和,對蛋白也不會(huì )產(chǎn)生太大影響。


 

以上就是上海金鵬分析儀器有限公司為大家整理總結關(guān)于體外重組蛋白表達的蛋白純化標簽如何選擇。

 

我們上海金鵬分析儀器有限公司是專(zhuān)業(yè)生產(chǎn)超微量核酸蛋白測定儀、化學(xué)發(fā)光成像系統、凝膠成像分析系統、紫外分析儀、核酸蛋白檢測儀、紫外檢測儀、蛋白質(zhì)分離純化系統、光化學(xué)反應儀、旋渦混合器、恒流泵、自動(dòng)部分收集器等十幾個(gè)系列產(chǎn)品的廠(chǎng)家,歡迎大家前來(lái)訂購


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