那么下面上海金鵬分析儀器有限公司為大家簡(jiǎn)單介紹一下關(guān)于體外重組蛋白表達的蛋白純化標簽如何選擇。 

       體外重組蛋白表達技術(shù)已經(jīng)滲透到生物學(xué)的各個(gè)領(lǐng)域。目前，體外重組蛋白表達系統主要有四類(lèi)：原核表達系統、哺乳動(dòng)物細胞表達、酵母表達系統及昆蟲(chóng)細胞表達。表達的一般實(shí)驗包括載體構建-表達鑒定-蛋白純化三大步驟。在構建載體階段，除了一些必要的表達元件，還需要考慮的密碼子優(yōu)化和標簽的選擇。選擇合適的標簽不但有利于蛋白的純化，促進(jìn)蛋白的可溶性，同時(shí)也不能影響蛋白的結構功能和下游應用。感謝使用上海金鵬蛋白純化系統Blupadstart進(jìn)行蛋白純化分離實(shí)驗。

本文詳細介紹了幾種蛋白純化標簽，幫助我們更好的設計實(shí)驗。
蛋白純化標簽比較

表1：各個(gè)標簽性能對比表

HIS-Tag（組氨酸標簽）

HIS-Tag蛋白純化的標簽
HIS-Tag本身的特性對目的蛋白沒(méi)有影響，不會(huì )形成二聚體；

1. 分子量較小，只有0.84KD，對蛋白的下游應用不會(huì )產(chǎn)生影響；

2. 原性低，可將純化的蛋白直接注射動(dòng)物進(jìn)行并制備抗體；

3. HIS-Tag與的轉錄翻譯機制兼容，有利于蛋白表達；

4. 可與其他標簽構建雙標簽表達，可用于多種蛋白表達系統，純化條件溫和對蛋白影響較小。

GST-Tag（谷胱甘肽巰基轉移酶標簽）
GST-Tag相對分子質(zhì)量較大，約為26KD，插入在目的蛋白的C末端或N末端，大腸桿菌中常用在N端。GST(谷胱甘肽巰基轉移酶) 蛋白本身是一個(gè)在**過(guò)程中起到重要作用的轉移酶。一般選擇GST標簽的目的有兩個(gè)，一是提高蛋白表達的可溶性，二是提高蛋白的表達量。蛋白表達純化結束后需根據不同的蛋白應用而確定是否切除標簽，標簽較大，切除與否需根據下游應用考慮。如果要去除GST融合部分，可用位點(diǎn)特異性蛋白酶切除。檢測方法可用GST抗體或表達的目的蛋白特異性抗體檢測。

HIS-Tag由6-10個(gè)組氨酸殘基組成，分子量不到0.84KD，，通常插入在目的蛋白的C末端或N末端。HIS-Tag是目前原核表達常用的標簽，蛋白純化完之后可以不需切除此標簽，也不會(huì )對蛋白產(chǎn)生功能影響。同時(shí)，蛋白純化步驟簡(jiǎn)便，純化條件溫和，對蛋白也不會(huì )產(chǎn)生太大影響。

以上就是上海金鵬分析儀器有限公司為大家整理總結關(guān)于體外重組蛋白表達的蛋白純化標簽如何選擇。

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