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超微量分光光度計的功能優(yōu)點(diǎn)
那么下面上海金鵬分析儀器有限公司為大家簡(jiǎn)單介紹一下關(guān)于超微量分光光度計的功能優(yōu)點(diǎn):
超微量分光光度計不僅涵蓋了可見(jiàn)光分光光度計的功能而且也可以進(jìn)行紫外分光光度計的應用,常用以下幾方面:
核酸的定量
核酸的定量是超微量分光光度計使用頻率高的功能??梢远咳苡诰彌_液的寡核苷酸,單鏈DNA、雙鏈DNA,以及RNA。核酸的高吸收峰的吸收波長(cháng)260nm。每種核酸的分子構成不一,因此其換算系數不同。定量不同類(lèi)型的核酸,事先要選擇對應消光因子。如:1OD的吸光值分別相當于50μg/ml的dsDNA,37μg/ml的ssDNA,40μg/ml的RNA,30μg/ml的Olig。測試后的吸光值經(jīng)過(guò)上述系數的換算,從而得出相應的樣品濃度。除了核酸濃度,分光光度計顯示幾個(gè)非常重要的比值表示樣品的純度,如A260/A280的比值,用于評估樣品的純度,因為蛋白的吸收峰是280nm。純凈的樣品,比值大于1.8(DNA)或者2.0(RNA)。如果比值低于1.8或者2.0,表示存在蛋白質(zhì)或者酚類(lèi)物質(zhì)的影響。A230表示樣品中存在一些污染物,如碳水化合物,多肽,苯分等,較純凈的核酸A260/A230的比值大于2.0。
UV-VIS常規可見(jiàn)-紫外檢測
全波長(cháng)超微量分光光度計可以像普通的紫外-可見(jiàn)分光光度計一樣行使功能。如BIO-DL MicroDrop可以顯示從185到910nm的光波下樣品的吸光值。較多可以同時(shí)檢測40個(gè)波長(cháng)下的吸光值并把數據顯示在報告中。
蛋白質(zhì)的直接定量(UV法)
這種方法是在280nm波長(cháng),直接測試蛋白。蛋白質(zhì)測定過(guò)程非常簡(jiǎn)單,先測試空白液,然后直接測試蛋白質(zhì)。蛋白質(zhì)直接定量方法,適合測試較純凈、成分相對單一的蛋白質(zhì)。紫外直接定量法相對于比色法來(lái)說(shuō),速度快,操作簡(jiǎn)單;但是容易受到平行物質(zhì)的干擾,如DNA的干擾;另外敏感度低,要求蛋白的濃度較高。
比色法蛋白質(zhì)定量
蛋白質(zhì)通常是多種蛋白質(zhì)的化合物,比色法測定的基礎是蛋白質(zhì)構成成分:氨基酸(如酪氨酸,絲氨酸)與外加的顯色基團或者染料反應,產(chǎn)生有色物質(zhì)。有色物質(zhì)的濃度與蛋白質(zhì)反應的氨基酸數目直接相關(guān),從而反應蛋白質(zhì)濃度。
比色方法一般有BCA,Bradford,Lowry等幾種方法。
Lowry法:以早期的Biuret反應為基礎,并有所改進(jìn)。蛋白質(zhì)與Cu2+反應,產(chǎn)生藍色的反應物。但是與Biuret相比,Lowry法敏感性更高。缺點(diǎn)是需要順序加入幾種不同的反應試劑;反應需要的時(shí)間較長(cháng);容易受到非蛋白物質(zhì)的影響;含EDTA,Tritonx-100,ammoniasulfate等物質(zhì)的蛋白不適合此種方法。
BCA(Bicinchoninineacidassay)法:這是一種較新的、更敏感的蛋白測試法。要分析的蛋白在堿性溶液里與Cu2+反應產(chǎn)生Cu+,后者與BCA形成螯合物,形成紫色化合物,吸收峰在562nm波長(cháng)。此化合物與蛋白濃度的線(xiàn)性關(guān)系*,反應后形成的化合物非常穩定。相對于Lowry法,操作簡(jiǎn)單,敏感度高。但是與Lowry法相似的是容易受到蛋白質(zhì)之間以及去污劑的干擾。
細胞密度(OD600)
實(shí)驗室確定生長(cháng)密度和生長(cháng)期,多根據經(jīng)驗和目測推斷的生長(cháng)密度。在遇到要求較高的實(shí)驗,需要采用分光光度計準確測細胞密度。OD600是追蹤液體培養物中微生物生長(cháng)的標準方法。
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