超微量分光光度計如何檢測蛋白A280

那么下面上海金鵬分析儀有限公司為大家簡(jiǎn)單介紹一下關(guān)于超微量分光光度計如何檢測蛋白A280:

蛋白和核酸不一樣，具有很強的多樣性。Protein A280功能應用于檢測那些含有Trp、Tyr殘基或者含有Cys-Cys二硫鍵的純蛋白，這些蛋白在280nm吸光度明顯。本機方法不需要構建標準曲線(xiàn)，而是檢測吸光度后，直接計算蛋白濃度。

Protein A280顯示紫外吸收光譜，檢測280nm處的吸光度后計算濃度（mg/ml）。和核酸檢測一樣，Protein A280記錄顯示的是10mm光程下的數據。

Nano-600在基座模式下可以*多檢測90mg/ml的BSA而不用稀釋。

當檢測樣品的吸光后的光強小于200時(shí)（10mm光程下），軟件會(huì )提示用戶(hù)選擇更小的測量光程，以保證測試的準確性。熒幕如下圖顯示。

決定液體表面張力的主要因素是溶液中水分子之間的氫鍵，通常情況下，水中的物質(zhì)，如蛋白、鹽離子、去污劑等都會(huì )通過(guò)破壞水分子之間的氫鍵來(lái)減小表面張力。雖然對于大部分樣品來(lái)說(shuō)，1ul的量就足夠用于檢測了，但由于表面張力下降，我們建議使用2ul的量以保證形成液柱。

可選擇或取消基線(xiàn)校準。蛋白檢測默認的基線(xiàn)校準波長(cháng)為340nm，用戶(hù)可根據試驗需要輸入不同的校準波長(cháng)。在任何情況下，基線(xiàn)都自動(dòng)設定為選擇波長(cháng)下的吸光度，所有波長(cháng)的吸光度讀數都是減去這個(gè)值的結果。

    注意：基線(xiàn)校準必須在進(jìn)行樣品檢測之前設定，樣品檢測之后設定無(wú)效。不選擇基線(xiàn)校準，光譜值將會(huì )產(chǎn)生偏移，計算的濃度也會(huì )改變。

⑵操作步驟：

①設定項目名稱(chēng)和樣品編號與蛋白類(lèi)型；

②使用緩沖液建立空白對照：取2ul空白溶液加到下基座上，放下上基座并點(diǎn)擊“空白”；

③使用干凈無(wú)塵布把基座上的空白溶液擦干凈；

    ④取2ul樣品滴加到下基座上，放下上基座，點(diǎn)擊“樣品”進(jìn)行檢測，檢測完成后界面如圖4.10；

    注意：每次檢測的樣品都必須是剛加入的。

⑤檢測完成后，必須用干凈的無(wú)塵布擦掉上下基座上的樣品，才可以檢測下一個(gè)樣品。

以上就是上海金鵬分析儀有限公司為大家整理總結關(guān)于超微量分光光度計如何檢測蛋白A280。

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