使用UV法應注意以下環(huán)節:
1 儀器的校正和檢定:
1.1 波長(cháng) 由于溫度變化對機械部分的影響,儀器的波長(cháng)經(jīng)常會(huì )略有變動(dòng),因此除應定期對所用的儀器進(jìn)行**校正檢定外,還應于測定前校正測定波長(cháng)。
1.2 吸收度 吸收度的準確度可用重鉻酸鉀的硫酸溶液檢定。
1.3 狹縫寬度 選擇儀器的狹縫寬度,應以減小狹縫寬度時(shí)供試品的吸收度不再增加為準,對于《中藥典》UV法測定的大部分品種,可以使用2nm縫寬,但對某些品種如青霉素鉀及鈉的吸收度檢查則需要1nm縫寬或更窄,否則其264nm的吸收度會(huì )偏低。
1.4 天平和玻璃儀器的檢定所用的容量?jì)x器及分析天平應經(jīng)過(guò)檢定,如有偏差應加上校正值。
1.5 吸收池配對 石英吸收池對紫外光亦有吸收,1 em的吸收池在波長(cháng)220~270 nm的范圍內,以空氣作為,其透光率往往小于,同時(shí)每個(gè)吸收池不可能*相同,故在每次測定前應做吸收池配對試驗。方法是取干燥潔凈的吸收池,均裝入測定用空白溶劑,以只吸收池作空白,用測定時(shí)所用的波長(cháng)測定其他吸收池的吸收度,后選擇吸收小的只作為配對,測定并記錄下其它吸收池的吸收度,供試品液的實(shí)際吸收度應是與吸收池(有空白溶劑時(shí))吸收度之差。為減少誤差,常用個(gè)配對杯測定若干樣品(也減少計算麻煩),但應注意換液時(shí)充分洗滌。
2 對溶劑的要求:由于溶劑與溶質(zhì)分子間形成氫鍵、偶化等的影響,可以使溶質(zhì)吸收波長(cháng)發(fā)生位移。通常性溶劑比非性溶劑的影響大,在選擇溶劑時(shí)應予以注意。測定供試品前,應先檢查所用的溶劑在測定供試品所用的波長(cháng)附近是否有吸收峰,是否影響供試品測定。每次測定時(shí)應采用同廠(chǎng)、同批號的試劑配制混合均勻的同批溶劑。
3 檢驗: 3.1 溶液配制 稱(chēng)量應按藥典規定進(jìn)行。配制測定溶液時(shí)稀釋轉移次數應盡可能少,轉移稀釋時(shí)所取容積般應不少于5mL。含量測定供試品應稱(chēng)取2份,如為對照品比較法,對照品也應稱(chēng)取2份。吸收系數檢查也應稱(chēng)取供試品2份,平行操作。每份結果對平均值的偏差應在4-0.5%以?xún)?。作鑒別或檢查時(shí)可取樣品1份。
3.2 測定 除另有規定外,應在規定的吸收峰波長(cháng)4-2 nm以?xún)?,再測試幾個(gè)點(diǎn)的吸收度,以核對供試品的吸收峰波長(cháng)位置是否正確,除另有規定外,吸收峰**長(cháng)應在該品種項下規定的波長(cháng)4-1nm以?xún)?,否則應考慮該試樣的真偽、純度以及儀器波長(cháng)的準確度。取吸收池時(shí),手指拿毛玻璃面的兩側。樣品溶液的量以池體積的4/5為宜,使用揮發(fā)性溶液時(shí)應加蓋,透光面要用擦鏡紙由上而下擦拭干凈,檢視應無(wú)殘留溶劑,為防止溶劑揮發(fā)后溶質(zhì)殘留在池子的透光面,可先用蘸有空白溶劑的擦鏡紙擦拭,然后再用干擦鏡紙拭凈。吸收池放人樣品室時(shí)應注意每次放入的方向相同。使用后用洗滌劑及水沖洗干凈,晾干防塵保存。吸收池如污染不易洗凈時(shí)可用發(fā)煙硫酸+硝酸(3:1 )混合液稍加浸泡后,洗凈備用。如用鉻酸鉀清潔液清洗時(shí),吸收池不宜在清潔液中長(cháng)時(shí)間浸泡,否則清潔液中的鉻酸鉀結晶會(huì )損壞吸收池的光學(xué)表面,并應充分用水沖洗,以防鉻酸鉀吸附于吸收池表面。