液相色譜系統的許多問(wèn)題都能在譜圖上反映出來(lái)。其中有一些問(wèn)題可以通過(guò)改變設備參數得到解決；而其他的問(wèn)題必須通過(guò)修改操作程序來(lái)解決。對于色譜柱和流動(dòng)相的正確選擇是得到好的色譜圖的關(guān)鍵。
A、 峰拖尾
1、篩板阻塞
        a、反沖色譜柱 b、更換進(jìn)口篩板 c、更換色譜柱
2、色譜柱塌陷   
        a、填充色譜柱
3、干擾峰
        a、使用更長(cháng)的色譜柱 b、改變流動(dòng)相或更換色譜柱
4、流動(dòng)相PH選擇錯誤
a、調整PH值。對于堿性化合物，低PH值更有利于得到對稱(chēng)峰
5、樣品與填料表面的溶化點(diǎn)發(fā)生反應
     a、加入離子對試劑或堿性揮發(fā)性修飾劑 b、更改色譜柱
B、 峰前延可能的原因
在大峰前，有小峰流出
柱死體積
樣品溶劑不適當
過(guò)濾片部分堵塞
柱過(guò)載
 1、柱溫低
      a、升高柱溫
 2、樣品溶劑選擇不恰當
      a、使用流動(dòng)相作為樣品溶劑
 3、樣品過(guò)載
      a、降低樣品含量
 4、色譜柱損壞
     a、見(jiàn)A1、A2
C、 峰分叉
  1、 保護柱或分析柱污染【柱中有死體積】
     a、取下保護柱再進(jìn)行分析。如果必要更換保護柱。如果分析柱阻塞，拆下來(lái)清洗。如果問(wèn)題仍然存在，   可能是柱子被強保留物質(zhì)污染，運用適當的再生措施。如果問(wèn)題仍然存在，入口可能被阻塞，更換篩板或更換色譜柱。
2、樣品溶劑不溶于流動(dòng)相
      a、改變樣品溶劑。如果可能采取流動(dòng)相作為樣品溶劑。
D、 峰變形
   1、樣品過(guò)載
      a、減少樣品載量
E、 早出的峰變形
   1、樣品溶劑選擇不恰當
    a、減少進(jìn)樣體積 b、運用低極性樣品溶劑
F、 早出的峰拖尾程度大于晚出的峰
  1、柱外效應
     a、調整系統連接（使用更短、內徑更小的管路） b、使用小體積的流通池
G、 K’增加時(shí)，脫尾更嚴重
    1、二級保留效應，反相模式
         a、加入三乙胺（或堿性樣品） b、加入乙酸（或酸性樣品） c、加入鹽或緩沖劑（或離子化樣品）
         d、更換一支柱子
     2、二級保留效應，正相模式
         a、加入三乙胺（或堿性樣品） b、加入乙酸（或酸性樣品） c、加入水（或多官能團化合物）
         d、試用另一種方法
     3、二級保留效應，離子對
         a、加入三乙胺（或堿性樣品）
H、 酸性或堿性化合物的峰拖尾
     1、緩沖不合適
         a、使用濃度50-100mM的緩沖液  b、使用Pka等于流動(dòng)相PH值的緩沖液
I、 額外的峰
    1、樣品中有其他組份
    2、前一次進(jìn)樣的洗脫峰
          a、增加運行時(shí)間或梯度斜率 b、提高流速
    3、空位或鬼峰
a、檢查流動(dòng)相是否純凈 b、使用流動(dòng)相作為樣品溶劑 c、減少進(jìn)樣體積
J、 保留時(shí)間波動(dòng)
  1、溫控不當
     a、調好柱溫
  2、流動(dòng)相組分變化
    a、防止變化（蒸發(fā)、反應等）
  3、色譜柱沒(méi)有平衡
    a、在每一次運行之前給予足夠的時(shí)間平衡色譜柱
K、 保留時(shí)間不斷變化
 1、流速變化
    a、重新設定流速
 2、泵中有氣泡
    a、從泵中除去氣泡
 3、流動(dòng)相選擇不恰當
    a、更換合適的流動(dòng)相 b、選擇合適的混合流動(dòng)相
L、 基線(xiàn)漂移
   1、柱溫波動(dòng)。（即使是很小的溫度變化都會(huì )引起基線(xiàn)的波動(dòng)。通常影響示差檢測器、電導檢測器、較低靈敏度的紫外檢測器或其它光電類(lèi)檢測器。）
      a、控制好柱子和流動(dòng)相的溫度，在檢測器之前使用熱交換器
   2、流動(dòng)相不均勻。（流動(dòng)相條件變化引起的基線(xiàn)漂移大于溫度導致的漂移。）
      a、使用HPLC級的溶劑，高純度的鹽和添加劑。流動(dòng)相在使用前進(jìn)行脫氣，使用中使用氦氣。
   3、流通池被污染或有氣體
       a、用甲醇或其他強極性溶劑沖洗流通池。如有需要，可以用1N的硝酸。（不要用鹽酸）
   4、檢測器出口阻塞。（高壓造成流通池窗口破裂，產(chǎn)生噪音基線(xiàn)）
       a、取出阻塞物或更換管子。參考檢測器手冊更換流通池窗。
   5、流動(dòng)相配比不當或流速變化
       a、更改配比或流速。為避免這個(gè)問(wèn)題可定期檢查流動(dòng)相組成及流速。
   6、柱平衡慢，特別是流動(dòng)相發(fā)生變化時(shí)
       a、用中等強度的溶劑進(jìn)行沖洗，更改流動(dòng)相時(shí)，在分析前用10-20倍體積的新流動(dòng)相對柱子進(jìn)行沖洗。
   7、流動(dòng)相污染、變質(zhì)或由低品質(zhì)溶劑配成
        a、檢查流動(dòng)相的組成。使用高品質(zhì)的化學(xué)試劑及HPLC級的溶劑
   8、樣品中有強保留的物質(zhì)（高K’值）以饅頭峰樣被洗脫出，從而表現出一個(gè)逐步升高的基線(xiàn)。
        a、使用保護柱，如有必要，在進(jìn)樣之間或在分析過(guò)程中，定期用強溶劑沖洗柱子。
   9、使用循環(huán)溶劑，但檢測器未調整。
       a、重新設定基線(xiàn)。當檢測器動(dòng)力學(xué)范圍發(fā)生變化時(shí)，使用新的流動(dòng)相。
   10、檢測器沒(méi)有設定在zui大吸收波長(cháng)處。
        a、將波長(cháng)調整至zui大吸收波長(cháng)處
M、 基線(xiàn)噪音（規則的）
   1、在流動(dòng)相、檢測器或泵中有空氣
         a、流動(dòng)相脫氣。沖洗系統以除去檢測器或泵中的空氣。
   2、漏液
        a、見(jiàn)第三部分。檢查管路接頭是否松動(dòng)，泵是否漏液，是否有鹽析出和不正常的噪音。如有必要，更換泵密封。
   3、流動(dòng)相混合不*
       a、用手搖動(dòng)使混合均勻或使用低粘度的溶劑
   4、溫度影響（柱溫過(guò)高，檢測器未加熱）
       a、減少差異或加上熱交換器
   5、在同一條線(xiàn)上有其他電子設備
       a、斷開(kāi)LC、檢測器和記錄儀，檢查干擾是否來(lái)自于外部，加以更正。
   6、泵振動(dòng)
       a、在系統中加入脈沖阻尼器
N、 基線(xiàn)噪音（不規則的） 
  1、 漏液
      a、見(jiàn)第三部分。檢查接頭是否松動(dòng)，泵是否漏液，是否有鹽析出和不正常的噪音。如有必要，更換密封。檢查流通池是否漏液。
  2、流動(dòng)相污染、變質(zhì)或由低質(zhì)溶劑配成
      a、檢查流動(dòng)相的組成。
  3、流動(dòng)相各溶劑不相溶
      a、選擇互溶的流動(dòng)相
  4、檢測器/記錄儀電子元件的問(wèn)題
      a、斷開(kāi)檢測器和記錄儀的電源，檢查并更正。
  5、系統內有氣泡
      a、用強極性溶液清洗系統
  6、檢測器內有氣泡
      a、清洗檢測器，在檢測器后面安裝背景壓力調節器
  7、流通池污染（即使是極少的污染物也會(huì )產(chǎn)生噪音。）
      a、用1N的硝酸（不能用磷酸）清洗流通池
  8、檢測器燈能量不足
      a、更換燈
  9、色譜柱填料流失或阻塞
      a、更換色譜柱
  10、流動(dòng)相混合不均勻或混合器工作不正常
      a、維修或更換混合器，在流動(dòng)相不走梯度時(shí)，建議不使用泵的混合裝置
O、 寬峰
  1、流動(dòng)相組成變化
     a、重新制備新的流動(dòng)相
  2、流動(dòng)相流速太低
     a、調節流速
  3、漏液（特別是在柱子和檢測器之間）
     a、見(jiàn)section 3。檢查接頭是否松動(dòng)、泵是否漏液、是否有鹽析出以及不正常的噪音。如果必要更換密封。
  4、檢測器設定不正確
     a、調整設定
  5、柱外效應影響
     a、柱子過(guò)載 b、檢測器對反應時(shí)間或池體積響應過(guò)大 c、柱子與檢測器之間的管路太長(cháng)或管路內徑太大 d、記錄儀響應時(shí)間太長(cháng)
     a、 小體積進(jìn)樣（例如：10ul而不是100ul）以1：10或1：100的比例稀釋樣品 b、減少響應時(shí)間或使用更小的流通池 c、 使用內徑為0.007-0.01的短管路 d、減少響應時(shí)間
  6、緩沖液濃度太低
     a、增加濃度
  7、保護柱污染或失效
     a、更換保護柱
  8、色譜柱污染或失效，塔板數較低
     a、更換同樣類(lèi)型的色譜柱。如果新柱子可以提供對稱(chēng)的色譜峰，則用強溶劑沖洗舊柱子。
  9、柱入口塌陷
     a、打開(kāi)柱入口，填補塌陷或更換柱子
  10、呈現兩個(gè)或多個(gè)未被*分離的物質(zhì)的峰
     a、選擇其它類(lèi)型的色譜柱以改善分離效果
  11、柱溫過(guò)低
     a、提高柱溫。除非特殊情況，溫度不宜超過(guò)75℃
  12、檢測器時(shí)間常數太大
     a、使用較小的時(shí)間常數
P、 分離度降低
   1、流動(dòng)相污染或變質(zhì)（引起保留時(shí)間變化）
       a、重新配置流動(dòng)相
   2、保護柱或分析柱阻塞
       a、去掉保護柱進(jìn)行分析。如果必要則更換保護柱。如果分析柱阻塞，可進(jìn)行反沖。如果問(wèn)題仍然存在色譜柱可能被強保留的污染物損壞，建議使用恰當的再生程序。如果問(wèn)題仍然存在，進(jìn)口可能阻塞了，更換入口處的篩板或更換色譜柱。
Q、 所有的峰面積都太小
   1、檢測器衰減設定過(guò)高
       a、減少衰減的設定
   2、檢測器時(shí)間常數設定太大
      a、設定較小的時(shí)間常數
  3、進(jìn)樣量太少
     a、增大進(jìn)樣量
 R、 所有的峰面積都太大
  1、檢測器衰減設定過(guò)低
     a、采取較大的衰減
  2、進(jìn)樣過(guò)多
     a、減少進(jìn)樣量
  3、記錄儀連接不正確
     a、正確連接記錄儀
S、液相色譜HPLC保留時(shí)間漂移的故障排除
保留時(shí)間不重現有兩種不同的情況：即保留時(shí)間漂移和保留時(shí)間波動(dòng)。前者是指保留時(shí)間僅沿單方向發(fā)生變化，而后者指保留時(shí)間無(wú)固定規律的波動(dòng)。將此兩種情況區分開(kāi)來(lái)對找到問(wèn)題的原因往往很有幫助。如，保留時(shí)間的漂移往往由柱老化引起；而柱老化不可能引起保留時(shí)間的無(wú)規律波動(dòng)。事實(shí)上，保留時(shí)間漂移的多半原因是不同機理的色譜柱老化，如固定相流失（例如通過(guò)水解），色譜柱污染（由樣品或流動(dòng)相所致）等。保留時(shí)間漂移的幾種zui常見(jiàn)的原因如下:
1：色譜柱平衡
    如果我們觀(guān)察到保留時(shí)間漂移，首先應考慮色譜柱是否已用流動(dòng)相*平衡。通常平衡需要10-20個(gè)柱體積的流動(dòng)相，但如果在流動(dòng)相中加入少量添加劑（如離子對試劑）則需要相當長(cháng)的時(shí)間來(lái)平衡色譜柱。
    流動(dòng)相污染也可能是原因之一。溶于流動(dòng)相中的少量污染物可能慢慢富集到色譜柱上，從而造成保留時(shí)間的漂移。應注意：水是很容易污染的流動(dòng)相成分。
2：固定相穩定性
    固定相的穩定性都是有限的，即使在推薦的PH范圍內使用，固定相也會(huì )慢慢水解。例如，硅膠基質(zhì)在pH4時(shí)水解穩定性。水解速度與流動(dòng)相類(lèi)型和配體有關(guān)。雙官能團配體和三官能團配體比單官能團配體的鍵合相要穩定；長(cháng)鏈鍵合相比短鏈鍵合相穩定；烷基鍵合相比氰基鍵合相穩定的多。
    經(jīng)常清洗色譜柱亦會(huì )加速色譜柱固定相的水解。其他硅膠基質(zhì)鍵合相在水溶液環(huán)境中也可以發(fā)生水解，如氨基鍵合相等。
3：色譜柱污染
    保留時(shí)間漂移的另一個(gè)常見(jiàn)原因是色譜柱污染。HPLC色譜柱是非常有效的吸附性過(guò)濾器，它可以過(guò)濾并吸附流動(dòng)相攜帶的任何物質(zhì)。污染源可以是：流動(dòng)相本身，流動(dòng)相容器，連接管、泵、進(jìn)樣器和儀器密封墊，以及樣品等。通常通過(guò)實(shí)驗可判斷污染的來(lái)源。
樣品中如果存在色譜柱上保留很強的組分，就可能是使保留時(shí)間漂移的潛在根源。這些根源通常是樣品基質(zhì)。如：配藥中的賦形劑，生化樣品（如血清）中的蛋白及類(lèi)脂類(lèi)化合物，食品樣品中的淀粉，環(huán)境水樣中的腐殖酸等。通常樣品中的強保留組分具有較高的分子量，在此情況下，保留時(shí)間漂移的同時(shí)或其后會(huì )有反壓的增加?？梢酝ㄟ^(guò)使用固相提?。⊿PE）等樣品前處理方法來(lái)去除樣品基質(zhì)的影響。
    避免色譜柱污染zui簡(jiǎn)單的方法是防患于未然。相比之下，找到問(wèn)題的所在并設計有效的清洗步驟以去除污染物要困難的多。通常使用在給定色譜條件下的強溶劑，但并非所有污染物都可以在流動(dòng)相中溶解。如THF可去除反相色譜柱中的許多污染物，但蛋白在THF中就不能溶解。DMSO常常用于去除反相色譜柱中的蛋白。
    使用保護柱是個(gè)非常有效的方法。反沖色譜柱僅是不得已時(shí)采用的辦法。
4：流動(dòng)相組成
    流動(dòng)相組成的緩慢變化也是保留時(shí)間漂移的常見(jiàn)原因。如流動(dòng)相中易揮發(fā)組分的揮發(fā)及循環(huán)使用流動(dòng)相等。
5：疏水坍塌
    當小孔徑、端基封口良好的反相填料色譜柱使用接近100%的水為流動(dòng)相時(shí)，有時(shí)會(huì )發(fā)生分離突然喪失及被分析物質(zhì)保留明顯降低或*不保留的現象，這就是疏水坍塌。此現象是由流動(dòng)相不浸潤固定相表面而致。挽救的辦法實(shí)現用含大量有機組分的流動(dòng)相浸潤固定相，再用高水含量的流動(dòng)相進(jìn)行平衡。由是色譜柱長(cháng)期儲存也會(huì )發(fā)生此現象。使用內嵌極性基團的反相色譜柱或非端基封口的色譜柱也可避免發(fā)生坍塌。