PCR新手指南:PCR現在又擴增不出來(lái)了怎么辦?
更新時(shí)間:2016-06-01 點(diǎn)擊次數:2529
這個(gè)問(wèn)題是常見(jiàn)的問(wèn)題,就是一個(gè)PCR實(shí)驗一直都做得很好,停一段時(shí)間后再做就不行了。一通亂找原因后還是不行,很痛苦!
找問(wèn)題要從大到?。?/p>
1、PCR擴增體系問(wèn)題
用其他正在進(jìn)行的且擴增正常的模板和引物證明PCR擴增體系沒(méi)有問(wèn)題,即PCR反應混合物、水、取液器、PCR儀、操作等都是好的(陽(yáng)性對照)
2、引物問(wèn)題
用以前擴增產(chǎn)物做模板(稀釋50倍),證明引物沒(méi)有問(wèn)題
3、只是模板問(wèn)題了。
因為樣本降解的可能性比引物降解的可能性高得多。也可能是樣本中的抑制物過(guò)多(新鮮時(shí)沒(méi)有溶出來(lái))。
不要靠運氣找問(wèn)題,先做*條很重要。亂找問(wèn)題常常讓人失去信心的。