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液相色譜儀的使用方法
更新時(shí)間:2015-07-10 點(diǎn)擊次數:1432

液相色譜儀的品牌、種類(lèi)很多,各家的使用方法也不盡一樣,主要看你是那一款的液相色譜儀,當初購買(mǎi)設備時(shí),廠(chǎng)家的工程師會(huì )培訓使用方法。液相色譜儀與結構儀器的聯(lián)用是一個(gè)重要的發(fā)展方向。液相色譜-質(zhì)譜連用技術(shù)受到普遍重視,如分析氨基甲酸酯農藥和多核芳烴等;液相色譜-紅外光譜連用也發(fā)展很快如在環(huán)境污染分析測定水中的烴類(lèi),海水中的不揮發(fā)烴類(lèi),使環(huán)境污染分析得到新的發(fā)展。

液相色譜儀的使用方法:

內容:

1  開(kāi)機

1.1  打開(kāi)電腦。

1.2  打開(kāi)液相色譜各個(gè)模塊的電源。

1.3  雙擊桌面“儀器—聯(lián)機",進(jìn)入聯(lián)機界面。

1.4  排氣:

1.4.1  手動(dòng)旋開(kāi)處沖洗閥(逆時(shí)針旋轉約1圈)。
1.4.2   右鍵單擊“泵"圖標區域,選擇“方法…"選項,進(jìn)入泵編輯畫(huà)面,設流速:5ml/min(一般為3-5ml/min),點(diǎn)擊“確定"。

1.4.3  右鍵單擊“泵" 圖標,點(diǎn)擊“控制…"選項,選中“ON",點(diǎn)擊“確定",則系統開(kāi)始沖洗,直到管線(xiàn)內(由溶劑瓶到泵入口)無(wú)氣泡為止,(一般為5分鐘),切換通道繼續沖洗,直到所有要用通道無(wú)氣泡為止。

1.4.4  右鍵單擊“泵" 圖標,點(diǎn)擊“方法…"選項,設流速:0ml/min,手動(dòng)旋緊沖洗閥。

1.4.5  右鍵單擊“泵"圖標,點(diǎn)擊“方法…"選項,按照方法要求選擇合適比例的流動(dòng)相,設流速:1.0ml/min。

1.4.6  同理右鍵單擊“柱溫箱",“檢測器"圖標,點(diǎn)擊“方法…"選項,按照方法的要求設置溫度,波長(cháng),點(diǎn)擊“控制" 選項,“ON"打開(kāi)柱溫箱和檢測器。

2  編輯方法

2.1  點(diǎn)擊“方法"-“編輯完整方法"開(kāi)始編輯完整方法。

2.2  選中除“數據分析 "外的三項,進(jìn)入下一選項卡。

2.3  方法信息:在“方法注釋"中加入方法的信息(如:This is for test?。?。進(jìn)入下一選項卡。

2.4  參數設定:在“流速"處輸入流量, 如1.0ml/min,停止時(shí)間:如10 min(該停止時(shí)間僅為做一個(gè)樣品需要的時(shí)間),按照要求選擇合適比例的流動(dòng)相配比,如乙腈:水=75:25,A為水,B為乙腈,則設置B:75%即可。進(jìn)入下一選項卡。

2.5  自動(dòng)進(jìn)樣器參數設定: 選擇“洗針進(jìn)樣"----可以輸入進(jìn)樣體積和洗瓶位置,進(jìn)入下一選項卡。

2.6  柱溫箱參數設定: 在“溫度"下面的空白方框內輸入所需溫度,如:40度。進(jìn)入下一選項卡。

2.7  UV檢測器參數設定: 在“波長(cháng)"下方的空白處輸入所需的檢測波長(cháng),如254nm。點(diǎn)擊確定。

2.8   在“ 運行時(shí)選項表 "中,選中“ 數據采集",點(diǎn)擊“確定"。
2.9  從“方法"菜單,選中“方法另存為…",輸入一方法名,如“測試",點(diǎn)擊“確定。

3  單次采集

3.1  從“運行控制"菜單中,選擇“樣品信息"選項,選擇合適的路徑,在“數據文件"中選擇 “前綴/計數器",輸入樣品瓶的位置,點(diǎn)擊“確定"。

3.2 基線(xiàn)平穩后約10分鐘,從“運行控制"菜單中選擇“運行方法"。

4  多次數據采集

4.1  按照步驟2 編輯完整方法。

4.2  點(diǎn)擊“序列"-“序列表",輸入“樣品瓶"“樣品名稱(chēng)",“進(jìn)樣次數",選擇合適的“做樣方法"

4.3  點(diǎn)擊“序列"-“序列參數",選擇序列數據的保存路徑(序列會(huì )自動(dòng)生成以“序列名稱(chēng)-時(shí)間"為名稱(chēng)的文件夾保存數據),數據建議以選擇 “前綴/計數器"保存。

4.4  從“序列"菜單,選中“序列另存為…",輸入一序列名,如“測試",點(diǎn)擊“確定。

4.5  從“運行控制"菜單中選擇“運行序列"。

5  數據分析(脫機狀態(tài)使用)

5.1  雙擊“儀器 —脫機"圖標 進(jìn)入的脫機畫(huà)面。

5.2  從“視圖"菜單中,點(diǎn)擊“數據分析"進(jìn)入數據分析畫(huà)面。

5.3  從“文件"菜單選擇“調用信號",選中您的數據文件名。點(diǎn)擊“ 確定",則數據被調出。(如預建立標準曲線(xiàn),應先打開(kāi)濃度較低的標樣圖譜。)

5.4  做譜圖優(yōu)化:從“圖形"菜單中選擇“信號選項"。從“范圍" 中選擇“滿(mǎn)量程" 或“自動(dòng)量程" 及合適的時(shí)間范圍或選擇“自定義量程" 調整。反復進(jìn)行,直到圖的比例合適為止。點(diǎn)擊“ 確定"。

6  積分:

6.1  從“積分"菜單中選擇“積分事件"選項,選擇合適的“斜率靈敏度",“峰寬",“zui小峰面積",“zui小峰高"。點(diǎn)擊 ,自動(dòng)加載積分參數。

6.2  點(diǎn)擊左邊“&radic;"圖標,將積分參數存入方法并退出“積分事件"。

6.3  如積分結果不理想,則修改相應的積分參數,直到滿(mǎn)意為止。

7  標準曲線(xiàn)

7.1  點(diǎn)擊“校正"-“校正設置",輸入“含量單位"。

7.2  點(diǎn)擊“校正"-“新建校正表",點(diǎn)擊確定。輸入“化合物名稱(chēng)"和“含量",點(diǎn)擊“確定",按照提示刪除其他組分。

7.3  至此完成單級校正,如要增加校正級別,應從“文件"菜單選擇“調用信號",選中您的數據文件名(第二個(gè)標樣),點(diǎn)擊“校正"-“添加級別",點(diǎn)擊確定,輸入“含量",依次增加校正級別。

8  打印報告

8.1   從“報告"菜單中選擇“設定報告"選項,點(diǎn)擊“定量結果"框中“定量"右側的黑三角,選中“外標法",其它選項不變,點(diǎn)擊“ 確定"。

8.2  從“報告"菜單中選擇“打印報告",則報告結果將打印到屏幕上,如想輸出到打印機上,則點(diǎn)擊“報告" 底部的“打印"鈕。

8.3  點(diǎn)擊“文件"-“另存為"-“方法",把數據分析方法保存,下次分析可直接在“文件"-“調用"-“方法"下,將該方法調出使用。(調用的方法中含有積分方法,標準曲線(xiàn)方法和打印報告方法)

9  關(guān)機

9.1  關(guān)機前,先關(guān)紫外燈,用相應的溶劑(甲醇或乙腈)充分沖洗系統大約30分鐘。(色譜柱zui終應保存在甲醇或乙腈中)

9.2  退出化學(xué)工作站,依提示關(guān),及其它窗口,關(guān)閉計算機。

9.3 關(guān)閉Agilent 1260各模塊電源開(kāi)關(guān)。

10  其它注意事項

10.1 當樣品運行時(shí),切勿打開(kāi)自動(dòng)進(jìn)樣器前遮蓋,否則進(jìn)樣過(guò)程停止。

10.2 系統發(fā)生漏液時(shí),機器會(huì )檢測到并停止進(jìn)樣,狀態(tài)指示燈為紅色。檢查擦干并安置好漏液處,擦干漏液傳感器,單擊ON按鈕,系統重新初始化。

10.3 注意紫外燈使用壽命,切勿來(lái)回開(kāi)關(guān)紫外燈。

液相色譜法只要求樣品能制成溶液,不受樣品揮發(fā)性的限制,流動(dòng)相可選擇的范圍寬,固定相的種類(lèi)繁多,因而可以分離熱不穩定和非揮發(fā)性的、離解的和非離解的以及各種分子量范圍的物質(zhì)。與試樣預處理技術(shù)相配合,HPLC所達到的高分辨率和高靈敏度,使分離和同時(shí)測定性質(zhì)上十分相近的物質(zhì)成為可能,能夠分離復雜相體中的微量成分。隨著(zhù)固定相的發(fā)展,有可能在充分保持生化物質(zhì)活性的條件下完成其分離HPLC成為解決生化分析問(wèn)題zui有前途的方法。由于HPLC具有高分辨率、高靈敏度、速度快、色譜柱可反復利用,流出組分易收集等優(yōu)點(diǎn),因而被廣泛應用到生物化學(xué)、食品分析、醫藥研究、環(huán)境分析、無(wú)機分析等各種領(lǐng)域。

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