液相色譜儀的品牌、種類(lèi)很多，各家的使用方法也不盡一樣，主要看你是那一款的液相色譜儀，當初購買(mǎi)設備時(shí)，廠(chǎng)家的工程師會(huì )培訓使用方法。液相色譜儀與結構儀器的聯(lián)用是一個(gè)重要的發(fā)展方向。液相色譜-質(zhì)譜連用技術(shù)受到普遍重視，如分析氨基甲酸酯農藥和多核芳烴等；液相色譜-紅外光譜連用也發(fā)展很快如在環(huán)境污染分析測定水中的烴類(lèi)，海水中的不揮發(fā)烴類(lèi)，使環(huán)境污染分析得到新的發(fā)展。

液相色譜儀的使用方法：

內容：

1  開(kāi)機

1.1  打開(kāi)電腦。

1.2  打開(kāi)液相色譜各個(gè)模塊的電源。

1.3  雙擊桌面“儀器—聯(lián)機"，進(jìn)入聯(lián)機界面。

1.4  排氣：

1.4.1  手動(dòng)旋開(kāi)泵處沖洗閥（逆時(shí)針旋轉約1圈）。
1.4.2   右鍵單擊“泵"圖標區域，選擇“方法…"選項，進(jìn)入泵編輯畫(huà)面，設流速：5ml/min（一般為3－5ml/min），點(diǎn)擊“確定"。

1.4.3  右鍵單擊“泵" 圖標，點(diǎn)擊“控制…"選項，選中“ON"，點(diǎn)擊“確定"，則系統開(kāi)始沖洗，直到管線(xiàn)內（由溶劑瓶到泵入口）無(wú)氣泡為止，（一般為5分鐘），切換通道繼續沖洗，直到所有要用通道無(wú)氣泡為止。

1.4.4  右鍵單擊“泵" 圖標，點(diǎn)擊“方法…"選項，設流速：0ml/min，手動(dòng)旋緊沖洗閥。

1.4.5  右鍵單擊“泵"圖標，點(diǎn)擊“方法…"選項，按照方法要求選擇合適比例的流動(dòng)相，設流速：1.0ml/min。

1.4.6  同理右鍵單擊“柱溫箱"，“檢測器"圖標，點(diǎn)擊“方法…"選項，按照方法的要求設置溫度，波長(cháng)，點(diǎn)擊“控制" 選項，“ON"打開(kāi)柱溫箱和檢測器。

2  編輯方法

2.1  點(diǎn)擊“方法"－“編輯完整方法"開(kāi)始編輯完整方法。

2.2  選中除“數據分析 "外的三項，進(jìn)入下一選項卡。

2.3  方法信息：在“方法注釋"中加入方法的信息（如：This is for test?。?。進(jìn)入下一選項卡。

2.4  泵參數設定：在“流速"處輸入流量， 如1.0ml/min，停止時(shí)間：如10 min（該停止時(shí)間僅為做一個(gè)樣品需要的時(shí)間），按照要求選擇合適比例的流動(dòng)相配比，如乙腈：水＝75：25，A為水，B為乙腈，則設置B：75％即可。進(jìn)入下一選項卡。

2.5  自動(dòng)進(jìn)樣器參數設定： 選擇“洗針進(jìn)樣"----可以輸入進(jìn)樣體積和洗瓶位置，進(jìn)入下一選項卡。

2.6  柱溫箱參數設定： 在“溫度"下面的空白方框內輸入所需溫度，如：40度。進(jìn)入下一選項卡。

2.7  UV檢測器參數設定： 在“波長(cháng)"下方的空白處輸入所需的檢測波長(cháng)，如254nm。點(diǎn)擊確定。

2.8   在“ 運行時(shí)選項表 "中，選中“ 數據采集"，點(diǎn)擊“確定"。
2.9  從“方法"菜單，選中“方法另存為…"，輸入一方法名，如“測試"，點(diǎn)擊“確定。

3  單次采集

3.1  從“運行控制"菜單中，選擇“樣品信息"選項，選擇合適的路徑，在“數據文件"中選擇 “前綴/計數器"，輸入樣品瓶的位置，點(diǎn)擊“確定"。

3.2 基線(xiàn)平穩后約10分鐘，從“運行控制"菜單中選擇“運行方法"。

4  多次數據采集

4.1  按照步驟2 編輯完整方法。

4.2  點(diǎn)擊“序列"－“序列表"，輸入“樣品瓶"“樣品名稱(chēng)"，“進(jìn)樣次數"，選擇合適的“做樣方法"

4.3  點(diǎn)擊“序列"－“序列參數"，選擇序列數據的保存路徑（序列會(huì )自動(dòng)生成以“序列名稱(chēng)－時(shí)間"為名稱(chēng)的文件夾保存數據），數據建議以選擇 “前綴/計數器"保存。

4.4  從“序列"菜單，選中“序列另存為…"，輸入一序列名，如“測試"，點(diǎn)擊“確定。

4.5  從“運行控制"菜單中選擇“運行序列"。

5  數據分析（脫機狀態(tài)使用）

5.1  雙擊“儀器 —脫機"圖標 進(jìn)入的脫機畫(huà)面。

5.2  從“視圖"菜單中，點(diǎn)擊“數據分析"進(jìn)入數據分析畫(huà)面。

5.3  從“文件"菜單選擇“調用信號"，選中您的數據文件名。點(diǎn)擊“ 確定"，則數據被調出。（如預建立標準曲線(xiàn)，應先打開(kāi)濃度較低的標樣圖譜。）

5.4  做譜圖優(yōu)化：從“圖形"菜單中選擇“信號選項"。從“范圍" 中選擇“滿(mǎn)量程" 或“自動(dòng)量程" 及合適的時(shí)間范圍或選擇“自定義量程" 調整。反復進(jìn)行，直到圖的比例合適為止。點(diǎn)擊“ 確定"。

6  積分：

6.1  從“積分"菜單中選擇“積分事件"選項，選擇合適的“斜率靈敏度"，“峰寬"，“zui小峰面積"，“zui小峰高"。點(diǎn)擊 ，自動(dòng)加載積分參數。

6.2  點(diǎn)擊左邊“√"圖標，將積分參數存入方法并退出“積分事件"。

6.3  如積分結果不理想，則修改相應的積分參數，直到滿(mǎn)意為止。

7  標準曲線(xiàn)

7.1  點(diǎn)擊“校正"－“校正設置"，輸入“含量單位"。

7.2  點(diǎn)擊“校正"－“新建校正表"，點(diǎn)擊確定。輸入“化合物名稱(chēng)"和“含量"，點(diǎn)擊“確定"，按照提示刪除其他組分。

7.3  至此完成單級校正，如要增加校正級別，應從“文件"菜單選擇“調用信號"，選中您的數據文件名（第二個(gè)標樣），點(diǎn)擊“校正"－“添加級別"，點(diǎn)擊確定，輸入“含量"，依次增加校正級別。

8  打印報告

8.1   從“報告"菜單中選擇“設定報告"選項，點(diǎn)擊“定量結果"框中“定量"右側的黑三角，選中“外標法"，其它選項不變，點(diǎn)擊“ 確定"。

8.2  從“報告"菜單中選擇“打印報告"，則報告結果將打印到屏幕上，如想輸出到打印機上，則點(diǎn)擊“報告" 底部的“打印"鈕。

8.3  點(diǎn)擊“文件"－“另存為"－“方法"，把數據分析方法保存，下次分析可直接在“文件"－“調用"－“方法"下，將該方法調出使用。（調用的方法中含有積分方法，標準曲線(xiàn)方法和打印報告方法）

9  關(guān)機

9.1  關(guān)機前，先關(guān)紫外燈，用相應的溶劑（甲醇或乙腈）充分沖洗系統大約30分鐘。（色譜柱zui終應保存在甲醇或乙腈中）

9.2  退出化學(xué)工作站，依提示關(guān)泵，及其它窗口，關(guān)閉計算機。

9.3 關(guān)閉Agilent 1260各模塊電源開(kāi)關(guān)。

10  其它注意事項

10.1 當樣品運行時(shí)，切勿打開(kāi)自動(dòng)進(jìn)樣器前遮蓋，否則進(jìn)樣過(guò)程停止。

10.2 系統發(fā)生漏液時(shí)，機器會(huì )檢測到并停止進(jìn)樣，狀態(tài)指示燈為紅色。檢查擦干并安置好漏液處，擦干漏液傳感器，單擊ON按鈕，系統重新初始化。

10.3 注意紫外燈使用壽命，切勿來(lái)回開(kāi)關(guān)紫外燈。

液相色譜法只要求樣品能制成溶液，不受樣品揮發(fā)性的限制，流動(dòng)相可選擇的范圍寬，固定相的種類(lèi)繁多，因而可以分離熱不穩定和非揮發(fā)性的、離解的和非離解的以及各種分子量范圍的物質(zhì)。與試樣預處理技術(shù)相配合，HPLC所達到的高分辨率和高靈敏度，使分離和同時(shí)測定性質(zhì)上十分相近的物質(zhì)成為可能，能夠分離復雜相體中的微量成分。隨著(zhù)固定相的發(fā)展，有可能在充分保持生化物質(zhì)活性的條件下完成其分離HPLC成為解決生化分析問(wèn)題zui有前途的方法。由于HPLC具有高分辨率、高靈敏度、速度快、色譜柱可反復利用，流出組分易收集等優(yōu)點(diǎn)，因而被廣泛應用到生物化學(xué)、食品分析、醫藥研究、環(huán)境分析、無(wú)機分析等各種領(lǐng)域。

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