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電泳時(shí)膠回收和凝膠成像的注意事項
更新時(shí)間:2015-06-04 點(diǎn)擊次數:1421

電泳時(shí)膠回收切膠的注意事項:

1. 電泳的buffer和gel都是新制的,切膠的臺子清理干凈,刀片洗凈滅菌,總之一句話(huà)就是保證切下的帶沒(méi)有外源dna污染。 

2. 切膠是要把整個(gè)目的片斷所在位置的膠全部回收。為了減少膠的體積,可以用相對比較薄的膠來(lái)做,只要夠點(diǎn)樣即可,也可采用薄而寬的梳子來(lái)跑膠。 

3. 關(guān)于防護,在一般有機玻璃后就足夠了,戴上防護面具以保護眼睛,如果戴樹(shù)脂眼鏡就可以了。要是非常害怕紫外照射,或者對于膠有特殊要求,例如要求不含EB,可以采用點(diǎn)marker和帶刻度的尺子一起照相的方法來(lái)確定目的條帶在膠上的位置進(jìn)行切膠。 

4. 按照正常程序點(diǎn)marker跑膠,然后切下有marker的膠,EB染色,紫外燈下與帶刻度的尺子一起照相。由于要回收的帶與marker間的相對位置已知,根據尺子來(lái)衡量未染色膠上目的帶的位置即可。如果覺(jué)得很難判斷,可以直接在marker邊點(diǎn)少量的樣,這樣位置就容易確定了。


凝膠成像分析系統的使用和注意事項:

凝膠成像分析系統:可以應用在蛋白電泳凝膠,DNA凝膠,樣品進(jìn)行圖象采集并進(jìn)行定性和定量分析,樣品包括:EB、SYBR Green、SYBR Gold、Texas Red、GelStar、Fluoroscecin、 Radiant Red等染色的核酸監測;以及Coomassie Blue、SYPRO Orange、各種染色的蛋白質(zhì)凝膠如考染等。(或UV,EB和有色及可見(jiàn)樣品成像)


使用注意事項:
? 注意開(kāi)機順序,先開(kāi)凝膠成像系統,再打開(kāi)電腦進(jìn)入軟件。
? 紫外凝膠照相時(shí)要防止EB 污染儀器,凝膠成像系統的門(mén)不能用污染的手套接觸,進(jìn)行軟件操作時(shí)同樣不能被污染的手套接觸。
? 在使用紫外光源照相的過(guò)程中,不可以打開(kāi)凝膠成像系統前面板。
? 照相后經(jīng)廢膠取出,并用較軟的紙擦拭干凈。
? 調焦時(shí)要輕,動(dòng)作不要劇烈。

?  環(huán)境電壓 不穩定 時(shí),請使用穩壓電源。使用過(guò)程中如遇斷電,請及時(shí)將儀器電源關(guān)閉,直至重新來(lái)電。

?  使用時(shí),請先打開(kāi)儀器的電源開(kāi)關(guān),再打開(kāi)電腦開(kāi)關(guān)并打開(kāi)軟件( Quantity One )。

?  保持觀(guān)測室內環(huán)境干燥,及時(shí)將在觀(guān)測板上的水或其他液體檫干(可使用軟質(zhì)紙,一般卷紙即可)。

?  觀(guān)測用 EB (溴乙錠)染色的凝膠時(shí),注意不要污染儀器表面。千萬(wàn)不要用手直接接觸凝膠,或戴著(zhù)接觸過(guò)凝膠的手套去接觸儀器的門(mén)和觀(guān)測臺的把手。

?  使用儀器時(shí),要將門(mén)及觀(guān)測臺關(guān)緊,否則將無(wú)法正常使用紫外燈。

?  盡可能不要將電腦連接到因特網(wǎng)或局域網(wǎng)上,同時(shí)在電腦上安裝殺毒軟件(推薦使用正版軟件),做到專(zhuān)機。

?  較長(cháng)時(shí)間不用儀器時(shí),請將儀器用防塵罩蓋上。

?  為延長(cháng)燈管的使用壽命,請觀(guān)測好凝膠后及時(shí)關(guān)閉光源(儀器自身有 15 分鐘的自動(dòng)保護程序)。


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