層析分離技術(shù)是我國高?！渡治鰧?shí)驗》中的基礎實(shí)驗。70年代后期國內研制的“核酸蛋白檢測儀"，使用某一波長(cháng)（280nm或254nm等）進(jìn)行定性檢測分離，用記錄儀描譜，長(cháng)期在高校實(shí)驗室使用。在我國科技人員努力下，近年來(lái)，市場(chǎng)上相繼出現了可代替記錄儀的“電腦采集器"、“電腦核酸蛋白檢測儀"、“雙波長(cháng)電腦核酸蛋白檢測儀"、“層析-電導聯(lián)用系統"等產(chǎn)品，迅速應用到教學(xué)實(shí)驗、科學(xué)研究和藥物生產(chǎn)領(lǐng)域。

一、 檢測原理

所有紫外吸收檢測器工作原理都是基于光的吸收定律---朗伯-比耳定律。該定律指出，當一束單色光(λ)輻射通過(guò)稀濃度物質(zhì)溶液時(shí)，如果溶劑不吸收光，則液體的吸光度與吸光物質(zhì)的濃度和光經(jīng)過(guò)溶液的距離成正比。其關(guān)系式為：

A(λ)=a(λ)bc

A=-LgT=Lg1/T

二、層析裝置分類(lèi)：

按描譜方式分有：記錄儀描譜和電腦描譜（外加采集分析器）

按檢測波長(cháng)分有：?jiǎn)尾ㄩL(cháng)檢測和雙波長(cháng)（多波長(cháng)）同步檢測

按檢驗器分有：核酸蛋白檢測和核酸蛋白檢測、電導檢測聯(lián)用

三、傳統檢測儀：

傳統層析實(shí)驗裝置由單波長(cháng)核酸蛋白檢測儀（外加電腦采集器或將電腦采集器裝入檢測儀中也屬此類(lèi)）、層析柱、恒流泵、部分收集器和記錄儀等部件構成。用一種波長(cháng)（如280nm或254nm等）下對已知物質(zhì)（蛋白或核酸等）進(jìn)行實(shí)驗檢測，高校實(shí)驗室的層析實(shí)驗裝置大多屬于此類(lèi)。特點(diǎn)如下：

1、檢測前必須選定一種波長(cháng)（280nm、254nm）進(jìn)行檢測，利用物質(zhì)特征波長(cháng)分離已知組分。

2、要求學(xué)生在檢測前一定要先調整透過(guò)率為100%，然后再調整吸光度為0。學(xué)生經(jīng)常會(huì )問(wèn)：雖然透過(guò)率和吸光度在此點(diǎn)（T=100%，A=0）符合了A=lg(1/T)關(guān)系，但怎樣保證在測量范圍內都符合朗伯--比爾定律？

3、傳統檢測儀為保證測量讀數落在儀器有效測量范圍內，在儀器面板上都設有靈敏度選擇裝置（2.0A、1.0A、0.、0.2A、0.1A、0.0等）。因此，測量前要選擇合適的靈敏度；②真正吸光度值是儀器顯示數與靈敏度的乘積；③測量中不要改變靈敏度，否則可能會(huì )帶來(lái)基線(xiàn)變化。

4、傳統檢測儀在不同靈敏下的測量結果均為0-10mv直流信號，將此信號輸出到記錄儀或電腦采集器。顯然，記錄紙或電腦屏幕上的吸光度也并非樣品實(shí)際的吸光度，也應受到儀器靈敏度的調制。

四、新型檢測儀

以對蛋白、核酸、肽等生物大分子物質(zhì)的檢測、分離和純化為目的，新型層析實(shí)驗系統中的電腦核酸蛋白檢測系統具有以下特點(diǎn)：

1、系統智能調整吸光度到0.000，透光率到100%。，并在測量范圍內的吸光度和透過(guò)率嚴格符合A=Lg(1/T)。

2、單波長(cháng)檢測或雙波長(cháng)同步檢測。

3、系統自帶數據采集工作站，檢測、采集、軟件工作站一體化系統集成。分析軟件具有實(shí)時(shí)描譜、分析參數、圖譜保存、圖譜打印、圖譜編輯等功能，提供峰高、峰寬、峰面積、歸一化、保留時(shí)間、半峰寬、峰底寬、面積含量、純度、層析柱分辯率等參數。

zui近出現的“單波長(cháng)核酸蛋白檢測_電導檢測聯(lián)用系統"、“雙波長(cháng)核酸蛋白檢測_電導檢測聯(lián)用系統"和“三波長(cháng)核酸蛋白檢測_電導檢測聯(lián)用系統"等產(chǎn)品，為科學(xué)研究、尋找目標物分離條件和提高工作效率提供了新方法。