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簡(jiǎn)單介紹一下,核酸濃度測量的230、260、280
更新時(shí)間:2022-01-18 點(diǎn)擊次數:17212

那么下面上海金鵬分析儀器有限公司為大家簡(jiǎn)單介紹一下關(guān)于核酸濃度測量的230、260、280

在核酸、蛋白濃度檢測過(guò)程中,230nm、260nm、280nm這幾個(gè)數值經(jīng)常會(huì )出現,那這幾個(gè)數值代表什么?他們之間的*優(yōu)關(guān)系又是什么呢?

數值的意義:

230nm:碳水化合物*高吸收峰的吸收波長(cháng),與A260的比值可進(jìn)行核酸樣品純度評估。A230產(chǎn)生負值可能是由于在低核酸濃度的樣液中存在一些干擾成分。

260nm:核酸*高吸收峰的吸收波長(cháng),其吸收紫外光的性質(zhì)是嘌呤環(huán)和嘧啶環(huán)的共軛雙鍵系統所具有的,所以嘌呤和嘧啶以及一切含有它們的物質(zhì),不論是核苷、核苷酸或核酸在260nm處都會(huì )一個(gè)*高吸收峰。

280nm:蛋白質(zhì)由于含有芳香氨基酸,因此也能吸收紫外光,通常蛋白質(zhì)的吸收高峰在280nm波長(cháng)處。其與260nm處的吸光度比值,經(jīng)常被用于判斷核酸樣品的純度。

除了這三個(gè)常見(jiàn)的波長(cháng)外,在核酸檢測過(guò)程中340nm往往會(huì )被用來(lái)檢測樣品緩沖液的濁度和其他干擾因子。該值應該接近0.0,如果不是,表明溶液中有懸浮物。

 

 

圖為 核酸、蛋白質(zhì)吸光度譜

比值的意義:

260/230、260/280

純度好的DNARNA,在pH7-8.5下:

A260 / A280比值應大于1.8DNA)或者2.0RNA)。

如果比值低于1.8 或者2.0,表示存在蛋白質(zhì)或者酚類(lèi)物質(zhì)的影響。

較純凈的核酸A260/A230的比值一般在1.8-2.2之間。

比值降低往往是樣品中存在一些污染物,如碳水化合物、鹽(胍鹽)等。

但實(shí)際樣品情況往往要相對復雜,如《分子克隆實(shí)驗指南》(第三版)所述,當 0.5BSA蛋白質(zhì)污染時(shí),A260A280的數值都下降,其結果是260/280的比值略微下降。但同時(shí),蛋白殘留會(huì )導致A230的數值明顯上升,進(jìn)而顯著(zhù)影響260/230的比值。也就是說(shuō),如果樣品的260/280比值略低于標準值,但260 /230下降明顯,那么就應該考慮污染原因是蛋白殘留,而不是胍鹽殘留。

酚的*大吸收峰在270nm。酚的殘留會(huì )增加A230、A260A280的數值,同時(shí)酚的吸收峰與核酸的吸收峰合并后,*大吸收峰會(huì )出現在270nm附近。因此當樣品*大吸收峰會(huì )出現在270nm附近,且260/280=1~1.5, 260/230=1~1.5,那么污染原因就應該考慮是酚殘留。

胍鹽會(huì )在小于230nm處產(chǎn)生大的吸收峰,進(jìn)而顯著(zhù)影響260/230比值,但胍鹽殘留不會(huì )影響A260、A280的數值,以及260/280的比值。也就是說(shuō),如果核酸樣品的260/280符合要求,但260/230<1,那么污染原因就應該考慮是胍鹽殘留。



 

 

 

以上就是上海金鵬分析儀器有限公司為大家整理總結關(guān)于核酸濃度測量的230、260、280。

我們上海金鵬分析儀器有限公司是專(zhuān)業(yè)生產(chǎn)超蛋白純化系統、超微量核酸蛋白測定儀、化學(xué)發(fā)光成像系統、凝膠成像分析系統、紫外分析儀、核酸蛋白檢測儀、紫外檢測儀、光化學(xué)反應儀、旋渦混合器、恒流泵、自動(dòng)部分收集器等為核心的十幾個(gè)產(chǎn)品系列的廠(chǎng)家,歡迎大家前來(lái)訂購


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