核酸印跡
更新時(shí)間:2021-05-24 點(diǎn)擊次數:1268
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核酸印跡是一種成熟的技術(shù),用于鑒定先前在凝膠中分離的特定核苷酸序列的存在。(
Southern印跡以其**者英**生物學(xué)家Edwin Southern命名。在Southern印跡中,分析DNA,在Northern印跡中如果是RNA。在這兩種情況下,來(lái)自完整凝膠的DNA或RNA都將轉移到一塊硝酸纖維素膜或尼龍膜上。然后將膜暴露于雜交探針,即具有特定序列的單個(gè)DNA片段,要確定其在靶DNA(或RNA)中的存在。對探針DNA進(jìn)行標記,以便可以通過(guò)射線(xiàn)照相,熒光或化學(xué)發(fā)光法對其進(jìn)行檢測。
印跡是核酸從凝膠到膜的轉移,這通常使用毛細管轉移方法完成。在此過(guò)程中,將凝膠放置在紙芯的頂部,該紙芯浸入包含轉移緩沖液的容器中。膜夾在凝膠和一堆吸收性材料(通常是干紙巾)之間,該吸收性材料通過(guò)毛細管作用使轉移緩沖液通過(guò)凝膠。然后,凝膠中的核酸分子被緩沖液攜帶并固定在膜上。真空吸印是另一種越來(lái)越流行的吸印程序,因為它速度更快且回收率很高。真空印跡法還使用緩沖液流將核酸帶轉移到膜上,但是它使用真空而不是毛細管作用來(lái)創(chuàng )建該流。
一旦轉移完成,在凝膠上的所有核酸帶就被固定(印跡)在膜上,雜交過(guò)程可能開(kāi)始。將膜與一小段DNA或RNA(探針)一起孵育,該DNA或RNA的序列與膜中特定的DNA或RNA序列互補。這允許探針與膜上的特定DNA片段雜交或結合。探針先前已被標記,通常用放射性原子,熒光染料標記或用酶標記,該酶在與合適的底物孵育后會(huì )產(chǎn)生化學(xué)發(fā)光信號。雜交后,標記的探針允許從膜上許多不同的DNA片段中檢測目標DNA片段。
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