那么下面上海金鵬分析儀器有限公司為大家簡(jiǎn)單介紹一下關(guān)于如何計算DNA片段的長(cháng)度:
在測量比細胞小得多的DNA片段的長(cháng)度時(shí),微生物學(xué)家需要技巧,而方便的方法是凝膠電泳儀。此方法依賴(lài)于DNA片段帶電的事實(shí),它是更昂貴的方法(例如X射線(xiàn)晶體學(xué))的替代方法,該方法負責發(fā)現DNA的雙螺旋結構。
凝膠電泳的工作原理
由于DNA分子帶電,因此會(huì )受到電流的影響。當您將它們放在中性凝膠中并在凝膠上通電時(shí),分子會(huì )向正極(陽(yáng)極)遷移。因為不同大小的DNA分子帶有相同的電荷,所以較小的分子會(huì )更快地傳播,因此此過(guò)程將分子分成多個(gè)條帶,可以與已知大小的樣本進(jìn)行比較。
電泳基本程序
該凝膠通常由瓊脂糖制成,瓊脂糖是一種多糖,在緩沖溶液中加熱后會(huì )形成半固體,微孔凝膠。在一端,凝膠形成微小的凹痕,稱(chēng)為孔,研究人員將研究中的DNA樣品與已知長(cháng)度的參考樣品(稱(chēng)為DNA階梯)放置在一起。階梯片段的長(cháng)度已經(jīng)通過(guò)另一種方法例如X射線(xiàn)晶體學(xué)來(lái)預定。
當凝膠浸入導電溶液中并施加電壓時(shí),碎片開(kāi)始遷移通過(guò)凝膠-先是較小的碎片,然后是較大的較慢的碎片。它們終根據大小形成類(lèi)似頻譜的波段。
一旦發(fā)生這種情況,研究人員將關(guān)閉電源,用DVA結合染料注入凝膠,并在紫外線(xiàn)下檢查樣本。使用梯子作為參考,研究人員可以確定可見(jiàn)帶中每個(gè)片段的大小。只有條帶可見(jiàn)–單個(gè)DNA片段太小而看不見(jiàn)。
確定未知片段的長(cháng)度
并非樣品中的每個(gè)譜帶都有可能與階梯上的譜帶配對,因此,為了確定這些未知片段的大小,科學(xué)家通常會(huì )繪制一個(gè)圖。x軸上的是梯子中每個(gè)頻段的行進(jìn)距離(以毫米為單位),而y軸上的是每個(gè)頻段的大小。當這些點(diǎn)通過(guò)曲線(xiàn)連接時(shí),在測量該帶行進(jìn)的距離(以毫米為單位)后,可以從曲線(xiàn)中推斷出任何帶的大小。
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