分子篩(凝膠過(guò)濾層析)蛋白純化系統的應用領(lǐng)域
更新時(shí)間:2021-04-29 點(diǎn)擊次數:1910
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分子篩(凝膠過(guò)濾層析)蛋白純化系統的應用領(lǐng)域
分子篩層析也并非一無(wú)是處,其應用領(lǐng)域主要包括以下方面:
1)脫鹽:
高分子(如蛋白質(zhì)、核酸、多糖等)溶液中的低分子量雜質(zhì),可以用分子篩層析除去,這一操作稱(chēng)為脫鹽。本法脫鹽操作簡(jiǎn)便、快速,蛋白質(zhì)和酶類(lèi)等在脫鹽過(guò)程中不易失活,樣品體積可達柱床體積的25%-30%,為了防止蛋白質(zhì)脫鹽后溶解度降低會(huì )形成沉淀吸附于柱上,一般用醋酸銨等揮發(fā)性鹽類(lèi)緩沖液使層析柱平衡,然后加入樣品,再用同樣緩沖液洗脫,收集的洗脫液用冷凍干燥法除去揮發(fā)性鹽類(lèi)。
2)分離提純:
分子篩層析已廣泛用于酶、蛋白質(zhì)、氨基酸、多糖、生物堿等物質(zhì)的分離提純。
3)測定高分子物質(zhì)的分子量:
用一系列已知分子量的標準品放入同一凝膠柱內,在同一條件下層析,記錄每一分鐘成分的洗脫體積,并以洗脫體積對分子量的對數作圖,在一定分子量范圍內可得一直線(xiàn),即分子量的標準曲線(xiàn)。測定未知物質(zhì)的分子量時(shí),可將此樣品加在測定了標準曲線(xiàn)的凝膠柱內洗脫后,根據物質(zhì)的洗脫體積,在標準曲線(xiàn)上查出它的分子量。
4)高分子溶液的濃縮:
通常將Sephadex G-25或50干膠投入到稀的高分子溶液中,這時(shí)水分和低分子量的物質(zhì)就會(huì )進(jìn)入凝膠粒子內部的孔隙中,而高分子物質(zhì)則排阻在凝膠顆粒之外,再經(jīng)離心或過(guò)濾,將溶脹的凝膠分離出去,就得到了濃縮的高分子溶液。
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