蛋白純化系統的實(shí)驗方法與步驟
更新時(shí)間:2021-03-31 點(diǎn)擊次數:2093
那么下面上海金鵬分析儀器有限公司為大家簡(jiǎn)單介紹一下關(guān)于蛋白純化系統的實(shí)驗方法與步驟:
凝膠過(guò)濾層析(gel filtration chromatography)法又稱(chēng)排阻層析或分子篩方法,主要是根據蛋白質(zhì)的大小和形狀,即蛋白質(zhì)的質(zhì)量進(jìn)行分離和純化。層析柱中的填料是某些惰性的多孔網(wǎng)狀結構物質(zhì),多是交聯(lián)的聚糖類(lèi)物質(zhì),使蛋白質(zhì)混合物中的物質(zhì)按分子大小的不同進(jìn)行分離。
蛋白純化系統的實(shí)驗方法
蛋白質(zhì)的凝膠過(guò)濾分離
實(shí)驗材料 蛋白質(zhì)
試劑、試劑盒 凝膠過(guò)濾緩沖液
儀器、耗材 布氏漏斗 凝膠過(guò)濾層析柱 分光光度計
蛋白純化系統的實(shí)驗步驟
1. 如果凝膠過(guò)濾的介質(zhì)是干粉,則需在凝膠過(guò)濾緩沖液中*溶脹。
2. 在遠離過(guò)往通道及直接光照的恒溫環(huán)境,將層折柱垂直安裝在穩固的實(shí)驗室支架上。
3. 用一注射器將凝膠過(guò)濾緩沖液從柱子的輸出管注入柱子,至緩沖液達到柱子支持體平面之上,注射器留在輸出端以堵住柱子。
4. 沿著(zhù)一根順柱子內壁而放的玻璃棒將凝膠混懸物倒入柱子至所設高度,再小心往凝膠頂部加入1 cm 高的一層緩沖液,并連接緩沖液貯存容器,取去堵著(zhù)柱子輸出管的注射器,用2~3倍柱床體積的緩沖液請洗柱子。
5. 流盡柱子凝膠頂部上面的緩沖液、關(guān)閉其輸出管。
6. 加入相當于柱床體積1%~5%的蛋白質(zhì)樣品。開(kāi)放輸出管,讓樣品流進(jìn)柱床,凝膠上面的柱子內壁以緩沖液沖洗。
7. 在凝膠頂上用吸管加入1 cm 高的緩沖液層,重新與緩沖液貯存容器連接,開(kāi)始洗脫。
8. 分部收集流出液。每分部相當于1%總柱床體積,分別測每個(gè)分部的A280,并各取小份樣品測生物活性,選出有活性的分部用SDS-PAGE檢測所含蛋白質(zhì)的數量和質(zhì)量,合并含目標蛋白的分部。
9. 用2~3個(gè)柱床體積的凝膠過(guò)濾緩沖液洗柱,柱子保存在含0.02%疊氮鈉的緩沖液中,柱于可無(wú)限次地使用。
以上就是上海金鵬分析儀器有限公司為大家整理總結關(guān)于蛋白純化系統的實(shí)驗方法與步驟。
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