那么下面上海金鵬分析儀器有限公司為大家簡(jiǎn)單介紹一下WB實(shí)驗中化學(xué)發(fā)光成像系統的使用:
一般的WB檢測過(guò)程中，都會(huì )有膜的封閉、一抗孵育、二抗孵育和底物顯色這四道“加工”工序。后面的底物顯色是關(guān)鍵的一部，也是有文章可作的一個(gè)部分。
WB顯色的方法主要有放射自顯影、底物化學(xué)發(fā)光ECL、底物熒光ECF和底物DAB呈色四種方法，發(fā)表文章通常是用底物化學(xué)發(fā)光ECL，操作比較簡(jiǎn)單，只需要購買(mǎi)現成的化學(xué)發(fā)光檢測試劑盒即可。試劑盒中一般使用的反應底物A和B分別是魯米諾(又名發(fā)光氨) 和過(guò)氧化氫，原理如下(二抗用HRP標記)：在HRP的催化作用下，魯米諾與過(guò)氧化氫反應生成一種過(guò)氧化物，過(guò)氧化物不穩定隨即分解，形成一種能發(fā)光的電子激發(fā)中間體，當后者由激發(fā)態(tài)返回至基態(tài)，就會(huì )產(chǎn)生熒光，可用X膠片和成像設備進(jìn)行檢測。使用傳統的X膠片顯影方法進(jìn)行WB實(shí)驗時(shí)，后面需要使用暗室曝光來(lái)進(jìn)行ECL檢測，但是建造暗室浪費空間，在暗室中曝光步驟繁瑣，沖洗X光片時(shí)會(huì )接觸有毒的化學(xué)藥劑?；瘜W(xué)發(fā)光成像設備能夠對ECL發(fā)光直接成像，獲得實(shí)驗結果，避免暗室曝光的不便。 　　
是否能夠拍攝到ECL的圖像主要取決于設備是不是帶有制冷的CCD，只有制冷的CCD才夠靈敏地捕捉到膜上發(fā)出的光。隨著(zhù)Cooled-CCD技術(shù)的發(fā)展，成像系統成本越來(lái)越低，因而在現在的實(shí)驗室里這些設備越來(lái)越普遍。本實(shí)驗室目前采用的是化學(xué)發(fā)光成像系統，具有靈敏度高，成像速度快、成像效果清晰等優(yōu)點(diǎn)。
該儀器的使用非常簡(jiǎn)單：
1）在使用前開(kāi)機預冷，待儀器溫度降到-20℃才可以進(jìn)行檢測；
2）將化學(xué)發(fā)光檢測試劑盒中的A和B按照1:1混合；
3）PVDF膜正面朝上放于暗箱，用移液槍將發(fā)光液均勻地涂在膜上，關(guān)閉暗箱箱門(mén)，進(jìn)行曝光； 　　
4）曝光可以自動(dòng)曝光，也可手動(dòng)曝光，一般先點(diǎn)擊自動(dòng)曝光，觀(guān)察成像效果，若不理想可再手動(dòng)調節曝光時(shí)間；另外該儀器還具有多張拍攝模式，可將一張膜在不同的曝光時(shí)間下連拍6張，使曝光更方便。內參一般顯影15s（影像條帶粗細深淺一致說(shuō)明內參已調齊），內參好說(shuō)明各步實(shí)驗操作均無(wú)誤，即可進(jìn)行后續的目的蛋白檢測，目的蛋白結果的好壞就取決于其表達量以及抗體的特異性和效價(jià)了。 與X膠片相比，化學(xué)發(fā)光成像系統具有瞬時(shí)影像處理、立即輸出、不需要膠片處理裝置及暗室等成本花費、可用軟件半定量分析等優(yōu)點(diǎn)，因而在現在的實(shí)驗室里化學(xué)發(fā)光成像系統的使用已經(jīng)逐漸取代傳統的暗室壓片曝光檢測。
 
以上就是上海金鵬分析儀器有限公司為大家整理總結關(guān)于WB實(shí)驗中化學(xué)發(fā)光成像系統的使用。
 
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