實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)在衛生應急中的應用
更新時(shí)間:2020-03-16 點(diǎn)擊次數:1378
實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)(Real-time quantitative Polymerase Chain Reaction簡(jiǎn)稱(chēng)Real Time PCR,如果用于RNA檢測,這被稱(chēng)為逆轉錄實(shí)時(shí)PCR即Real-time RT-PCR)是實(shí)時(shí)PCR法,它是指對DNA或經(jīng)過(guò)反轉入(RT-PCR)的RNA通過(guò)聚合酶鏈式反應并實(shí)時(shí)監測DNA的放大過(guò)程,在擴增的指數增長(cháng)期就測量擴增產(chǎn)物,因為擴增指數增長(cháng)期測量值與特異DNA(RNA)起始量存在相關(guān)性,從而實(shí)現定量檢測。
Real Time PCR的基本目標是測量和鑒別非常微量的特異性核酸,從而可通過(guò)監測CT值而實(shí)現對原始目標基因的含量定量。目前被普遍使用的多種常規PCR方法如各種凝膠電泳PCR法,終點(diǎn)熒光定量法或PCR-ELISA法叫做終點(diǎn)PCR法。實(shí)時(shí)熒光定量PCR法大的點(diǎn)是克服了終點(diǎn)PCR法進(jìn)入平臺期或叫飽和期后定量的較大誤差,實(shí)現DNA/RNA的定量。
普通PCR技術(shù)發(fā)明于1983年,而實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)發(fā)明于上世紀九十年代并于1996年生產(chǎn)出了上第臺實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀,實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)得以實(shí)現的技術(shù)要素主要有熒光定量PCR試劑盒和實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀,我熒光定量PCR試劑盒研發(fā)實(shí)力強大,生產(chǎn)廠(chǎng)較多,臨床診斷的品種如HBV/HCV及禽流感診斷試劑盒性能良、供應充足,基本實(shí)現產(chǎn)化。在豬流感病毒RNA核酸序列明確的情況下,利用現有的試劑研發(fā)平臺,人感染豬流感實(shí)時(shí)熒光定量PCR診斷試劑盒很快就會(huì )面世。實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀由于技術(shù)含量,只有少數幾中企業(yè)有能力生產(chǎn)如西安天隆科技有限公司生產(chǎn)的TL-988系列儀器不但取得了發(fā)明、科學(xué)技術(shù)獎、重點(diǎn)新產(chǎn)品證書(shū)、醫療器械注冊證,而且被發(fā)改委確立為技術(shù)產(chǎn)業(yè)化示范工程2008年生物醫學(xué)工程專(zhuān)項,產(chǎn)品性能達到際*水平,在乳品檢測行業(yè)*比進(jìn)口儀器還[1-3]。實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀應用廣泛,1999年開(kāi)始,西方發(fā)達嘗試將PCR應用于臨床傳染病診斷、食品安全檢測以及血液篩查,目前已相當普及。2008年12月13日中衛生部下發(fā)《衛生應急隊伍裝備參考目錄》(衛辦應急發(fā)[2008]207號),其中要求縣以上衛生應急隊伍建設中必須配備PCR儀和實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀作為傳染病控制類(lèi)裝備。