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核酸蛋白分離層析儀的純化方法
更新時(shí)間:2020-01-27 點(diǎn)擊次數:1365
   核酸蛋白分離層析儀的純化方法
  沉淀法
 ?。?)鹽析沉淀法
  這是根據不同蛋白質(zhì)在一定濃度的鹽溶液中溶解度降低程度不同,而達到彼此分離的方法,是蛋白質(zhì)和酶提純工藝中較早采用,且至今仍廣泛應用的方法。
 
  蛋白質(zhì)易溶于水,因為其分子的-COOH-NH2和-OH都是親水基團,這些基團與極性水分子相互作用形成水化層,包圍于蛋白質(zhì)分子周?chē)纬?~100nm大小的親水膠體,從而削弱了蛋白質(zhì)分子之間的作用力。
 
  當大量鹽加到蛋白質(zhì)溶液中,高濃度的鹽離子(如硫酸銨的SO42-和NH4+)有很強的水化力,可奪取蛋白質(zhì)分子的水化層,使之"失水",于是蛋白質(zhì)膠粒凝結并沉淀析出。
 
 ?。?)等電點(diǎn)沉淀法
  是利用蛋白質(zhì)在等電點(diǎn)時(shí)溶解度較低,而各種蛋白質(zhì)具有不同的等電點(diǎn)來(lái)分離蛋白質(zhì)的方法,稱(chēng)為等電點(diǎn)沉淀法。
 
  由于等電點(diǎn)時(shí)蛋白質(zhì)的凈電荷為零,失去了水化膜和分子間的相斥作用,疏水性氨基酸殘基暴露,蛋白質(zhì)分子相互靠攏聚集,易形成沉淀析出。
 
 ?。?)有機溶劑沉淀法
  此法原理是:與水互溶的有機溶劑(如甲醇、乙醇等)能使某些蛋白質(zhì)在水中的溶解度顯著(zhù)降低。在室溫下,有機溶劑不僅能夠引起蛋白質(zhì)的沉淀,而且伴隨變性。
 
  因此,通常要將有機溶劑冷卻,然后在不斷的攪拌下加入有機溶劑,以防止局部濃度過(guò)高,蛋白質(zhì)變性問(wèn)題就可以很大程度上得到解決。
 
  用此法析出的沉淀一般比鹽析法易過(guò)濾或離心沉降,分離后的蛋白質(zhì)沉淀應立即用水或者緩沖液溶解,以達到降低有機溶劑的濃度的目的。此法在血液制品的制備過(guò)程中較多使用。

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