一、概念
利用混和物中各組分理化性質(zhì)（吸附力、分子形狀、大小、分子極性、分子親和力以及分配系數）的差異，在物質(zhì)經(jīng)過(guò)兩相中進(jìn)行分離的一種技術(shù)。
本世紀初（1903年），植物學(xué)家M.C.Jber發(fā)現并使用這一技術(shù)證明了植物的葉子中不僅有葉綠素，還含有其他色素，實(shí)際上他使用的吸附層析?，F在層系法已成為生化、分子生物學(xué)及其它學(xué)科領(lǐng)域有效的分離、分析工具之一。
二、原理
具體過(guò)程：可分離物質(zhì)：糖類(lèi)、有機酸、氨基酸、核苷酸。
三、分類(lèi)
1. 按兩相所處物理狀態(tài)分類(lèi)
氣相層析：氣液層析（固定相為液體）和氣固層析（固定相為固體），流動(dòng)相為氣體。
液相層析：液液層析（固定相為液體）和液固層析（固定相為固體），流動(dòng)相為液體。
2. 按層析方式分類(lèi)
柱層析：固定相裝于柱內，使樣品沿著(zhù)一個(gè)方向移動(dòng)而分離。
薄層層析：將適當粘度的固定相均勻鋪在薄板上，點(diǎn)樣后，用流動(dòng)相展開(kāi)。
紙層析：用濾紙作液體的載體，點(diǎn)樣后用流動(dòng)相展開(kāi)。
3. 根據層析原理分類(lèi)：常用分類(lèi)法
（1）吸附層析：固定相是固體吸附劑，通過(guò)對不同溶質(zhì)吸附力強弱不同進(jìn)行分離。
（2）分配層析：利用兩相中的分配系數不同。
分配系數：當一種溶質(zhì)在兩種給定的互不相溶的溶劑中分配時(shí)，在一定溫度下達到平衡后，溶質(zhì)在兩相中的濃度比值為一常數，即分配系數（Kd）
Kd＝Ca / Cb
Ca和Cb分別代表某一物質(zhì)在互不相溶的兩相，A相（動(dòng)相）和B相（靜相）中的濃度。
（3）離子交換層析：固定相是離子交換劑，各組分與其親和力不同
（4）凝膠層析：固定相是多孔凝膠，根據流動(dòng)相中溶質(zhì)的分子量大小差異進(jìn)行分離
（5）親和層析：利用固定相載體表面偶聯(lián)具有特殊親和作用的配基，與溶質(zhì)分子發(fā)生可逆的特異性結合進(jìn)行分離
（6）金屬螯合層析
（7）疏水層析
（8）反相層析
四、凝膠層析（又叫凝膠過(guò)濾或分子篩）
凝膠層析是指混和物隨流動(dòng)相流經(jīng)固定相的層析柱時(shí)，混合物中各組分按其分子大小不同而被分類(lèi)的技術(shù)。
1. 原理
凝膠層析的固定相是凝膠。凝膠是一種不帶電荷的具有三維空間多孔網(wǎng)狀結構的物質(zhì)，凝膠的每個(gè)顆粒內部都具有很多細微的小孔，如同篩子一樣。
常用凝膠有瓊脂糖凝膠、聚丙烯酰胺凝膠、葡聚糖凝膠等。
葡聚糖凝膠介質(zhì)是由多聚葡聚糖與環(huán)氧綠丙烷交連而成。zui常用的葡聚糖凝膠層析介質(zhì)是Sephadex G系列，不同型號的凝膠用G表示，G代表交聯(lián)度，從G10到G100。“G”后面的 數字表示每10g干膠的吸水量，可根據待分離混和物分子量大小選用不同“G”值的凝膠。
2. 分離過(guò)程：
樣品隨洗脫液的流動(dòng)下移
3. 影響凝膠柱層析的主要因素
（1）層析柱的選擇與裝填
層析柱的大小應根據分離樣品量的多少及對分辨率的要求而定。凝膠柱填裝后用肉眼觀(guān)察應均勻、無(wú)紋路、無(wú)汽泡。
（2）流動(dòng)相――洗脫液的選擇：是含有一定濃度鹽的緩沖液，目的是為了防止凝膠可能有吸附作用。其選擇主要取決于待分離樣品，一般來(lái)說(shuō)只要能溶解洗脫物質(zhì)，并不使其變性的緩沖液都可用于凝膠層析。
（3）加樣量：加樣量的多少應根據具體的實(shí)驗而定：一般分級分離時(shí)加樣量約為凝膠柱床體積的1％－5％，而分組分離時(shí)加樣量約為凝膠柱床體積的10%-25%.
（4）凝膠再生：葡聚糖凝膠再生使用NaOH（0.2M）和NaCl(0.5M)混合液處理。
五、離子交換層析
離子交換層析是利用固定相偶聯(lián)的離子交換基團和流動(dòng)相解離的離子化合物之間發(fā)生可逆的離子交換反應而進(jìn)行的分離方法。
1. 原理
離子交換交換層析是利用離子交換劑對各種離子的親和力不同，借以分離混和物中各種離子的一種技術(shù)。其主要特點(diǎn)是依靠帶有相反電荷的顆粒之間的吸引力的作用。
離子交換層析的固定相是載有大量電荷的離子交換劑，流動(dòng)相是具有一定pH值和一定離子強度的電解質(zhì)溶液。
離子交換劑按其所帶電荷性質(zhì)，分為：
陰離子交換劑帶正電荷，與混合物中帶負電的組分結合 陰離子交換層析。
陽(yáng)離子交換劑 帶負電荷，與混合物中帶正電的組分結合 陽(yáng)離子交換層析。
常用離子交換劑有：離子交換樹(shù)脂，離子交換纖維素等
