液相色譜儀由高壓液體泵、檢測器及液相色譜柱等三部分組成，其中液相色譜柱的正確安裝和使用，是液相色譜工作的關(guān)鍵；也是液相色譜工作者獲得正確可靠的實(shí)驗數據的必經(jīng)之路。
        一、液相色譜柱的安裝：
             1、液相色譜柱的結構：
            a、空柱由柱接頭、柱管及濾片組裝而成。
            柱接頭采用低死體積結構，柱接頭是兩端螺紋組件，一端是為7/16英寸外螺紋，另一端是3／16英寸的內螺紋（國內外已規范化）。7／16英寸外螺紋與1／4英寸柱管（Φ6.35mm）連接，中間放置壓壞用于密封。3／16英寸的內螺紋與1／16英寸（Φ1.57mm）的連接管連接，中間也放置壓環(huán)用于柱接頭的密封。為了盡量減少柱外死體積，在安裝色譜柱時(shí)，用Φ1.57mm連接管通過(guò)空心螺釘壓環(huán)后要盡量插到底，然后再擰緊空心螺釘。壓環(huán)被空心螺釘擠壓變形后緊箍在連接管上（連接管通過(guò)壓環(huán)后露出的管長(cháng)度應嚴格控制在2．5mm長(cháng)或其他固定尺寸）。
            在兩端柱接頭內，柱管兩端各放置一片不銹鋼濾片（或濾網(wǎng)），用于封堵柱填料不被流動(dòng)相沖出柱外而流失?？罩鹘M件均為316#不銹鋼材質(zhì)，能耐受一般的溶劑作用。但由于含氯化物的溶劑對其有一定的腐蝕性，故使用時(shí)要注意，柱及連接管內不能長(cháng)時(shí)間存留此類(lèi)溶劑，以避免腐蝕。
            b、柱填料：
            液相色譜柱的分離作用是在填料與流動(dòng)相之間進(jìn)行的，柱子的分類(lèi)是依據填料類(lèi)型而定。
            正相柱：多以硅膠為柱填料。根據外型可分為無(wú)定型和球型兩種，其顆粒直徑在3—10 
            μm的范圍內。另一類(lèi)正相填料是硅膠表面鍵合—CN，-NH2等官能團即所謂的鍵合相硅膠。
            反相柱：主要是以硅膠為基質(zhì)，在其表面鍵合十八烷基官能團（ODS）的非極性填料。也有無(wú)定型和球型之分。
            常用的其他的反相填料還有鍵合C8、C4、C2、苯基等，其顆粒粒徑在3—10 μm之間。
            2，色譜柱的安裝：
            a、拆開(kāi)柱包裝盒，確認色譜柱的類(lèi)型、尺寸、出廠(chǎng)日期以及柱內貯存的溶劑。
                    b、擰下柱兩端接頭的密封堵頭放回包裝盒供備用。
            c、 按柱管上標示的流動(dòng)相流向，將色譜柱的入口端通過(guò)連接管與進(jìn)樣閥出口相連接（如條件允許，建議在柱前使用保護柱）；柱的出口與檢測器連接。連接管是外徑為1.57mm、內徑為0.1-0.3mm的不銹鋼管。連接管的兩端均有空心螺釘及密封用壓環(huán)。在接管時(shí)一定要設法降低柱外死體積。連接管通過(guò)空心螺釘、壓環(huán)后盡量用力插到底，然后順時(shí)針擰緊空心螺釘，直到擰不動(dòng)為止，再用扳手繼續順時(shí)針擰1／4-1／2圈，切記不要用力過(guò)大。如色譜柱通過(guò)流動(dòng)相加壓后有漏液現象，請用扳手繼續順時(shí)針擰1／4圈，直至不漏液為止。
         二、液相色譜柱的使用：
            色譜柱在使用前，進(jìn)行柱的性能測試，并將結果保存起來(lái)，作為今后評價(jià)柱性能變化的參考。但要注意：柱性能可能由于所使用的樣品、流動(dòng)相、柱溫等條件的差異而有所不同；另外，在做柱性能測試時(shí)是按照色譜柱出廠(chǎng)報告中的條件進(jìn)行（出廠(chǎng)測試所使用的條件是*條件），只有這樣，測得的結果才有可比性。
            1、樣品的前處理：
            a、使用流動(dòng)相溶解樣品。
            b、使用予處理柱除去樣品中的強極性或與柱填料產(chǎn)生不可逆吸附的雜質(zhì)。
            c、使用0.45μm的過(guò)濾膜過(guò)濾除去微粒雜質(zhì)。
            2、流動(dòng)相的配制：
            液相色譜是樣品組分在柱填料與流動(dòng)相之間質(zhì)量交換而達到分離的目的，因此要求流動(dòng)相具備以下的特點(diǎn)：
            a、流動(dòng)相對樣品具有一定的溶解能力，保證樣品組分不會(huì )沉淀在柱中（或長(cháng)時(shí)間保留在柱中）。
            b、流動(dòng)相具有一定惰性，與樣品不產(chǎn)生化學(xué)反應（特殊情況除外）。
            c、流動(dòng)相的黏度要盡量小，以便在使用較長(cháng)的分析柱時(shí)能得到好的分離效果；同時(shí)降低柱壓降，延長(cháng)液體泵的使用壽命（可運用提高溫度的方法降低流動(dòng)相的黏度）。
            d、流動(dòng)相的物化性質(zhì)要與使用的檢測器相適應。如使用UV檢測器，使用對紫外吸收較低的溶劑配制。e、流動(dòng)相沸點(diǎn)不要太低，否則容易產(chǎn)生氣泡，導致實(shí)驗無(wú)法進(jìn)行。
            f、在流動(dòng)相配制好后，一定要進(jìn)行脫氣。除去溶解在流動(dòng)相中的微量氣體既有利于檢測，還可以防止流動(dòng)相中的微量氧與樣品發(fā)生作用。
            3、流動(dòng)相流速的選擇：
            因柱效是柱中流動(dòng)相線(xiàn)性流速的函數，使用不同的流速可得到不同的柱效。對于一根特定的色譜柱，要追求*柱效，使用*流速。對內徑為4.6mm的色譜柱，流速一般選擇1ml／min，對于內徑為4.0mm柱，流速0.8ml／min為佳。
            當選用*流速時(shí)，分析時(shí)間可能延長(cháng)?？刹捎酶淖兞鲃?dòng)相的洗滌強度的方法以縮短分析時(shí)間（如使用反相柱時(shí)，可適當增加甲醇或乙腈的含量）。
            注意：
            a．由于甲醇廉價(jià)，對于反相柱推薦使用甲醇體系（必須使用乙腈的場(chǎng)合除外）。
            b．對于正相柱推薦使用沸程為30-60℃的石油醚或提純后的己烷作流動(dòng)相，沒(méi)有提純的己烷不得使用。用水使用超純水（電阻率大于18兆歐），去離子水及雙蒸水中含有酚類(lèi)雜質(zhì)，有可能影響分析結果。
            c．含水流動(dòng)相zui在實(shí)驗前配制，尤其是夏天使用緩沖溶液作為流動(dòng)相不要隔夜。加入*，防止細菌生長(cháng)。
            d．流動(dòng)相要求使用0.45 μm濾膜過(guò)濾，除去微粒雜質(zhì)。
            e．使用HPLC級溶劑配制流動(dòng)相，使用合適的流動(dòng)相可延長(cháng)色譜柱的使用壽命，提高柱性能。
            4、柱性能測試：
            啟動(dòng)液相色譜儀：a、流動(dòng)相流速設定為1ml／min。
            b、UV檢測器波長(cháng)設定為254nm。
            使用出廠(chǎng)測試時(shí)使用的流動(dòng)相組成及測試樣品。
            記錄并計算測試結果。